枳实提取物通过调控NF-κB/Nrf2/HO-1信号通路及肠道菌群改善DSS诱导的小鼠结肠炎

《Frontiers in Nutrition》：Aurantii Fructus extract alleviates DSS-induced colitis in mice via regulating NF-κB and Nrf2/HO-1 signaling pathways and modulating intestinal microbiota

本研究揭示了枳实提取物（AFE）对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎（UC）的多重保护机制。实验证明AFE能显著改善结肠病理损伤，通过抑制NF-κB通路降低促炎因子（TNF-α/IL-6/IL-1β），激活Nrf2/HO-1通路提升抗氧化指标（GSH/MDA），并增强肠道屏障蛋白ZO-1表达。16S rRNA测序显示AFE可逆转肠道菌群失调，抑制致病菌（如Mucispirillum）并促进有益菌增殖。该研究为中药治疗IBD提供了新的药理依据。

　　

引言

溃疡性结肠炎（UC）是一种慢性炎症性肠病（IBD），其特征为黏膜和黏膜下层的侵蚀性病变，伴随腹泻、血便、腹痛和体重减轻等症状。当前氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫抑制剂和生物制剂等药物治疗存在较多副作用。枳实（Aurantii Fructus, AF）作为药食同源的中药材，富含黄酮类、挥发油等活性成分，具有抗炎、抗氧化及调节胃肠功能的作用，但其治疗UC的科学机制尚不明确。

材料与方法

通过高效液相色谱法（HPLC）鉴定枳实提取物（AFE）中14种活性成分，其中柚皮苷（88.42 mg/g）、新橙皮苷（46.06 mg/g）和橙皮苷（9.25 mg/g）占总活性成分的90.8%。采用3.5%葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导C57BL/6雄性小鼠构建UC模型，设置对照组、模型组、SASP阳性药组（200 mg/kg）及AFE低中高剂量组（0.75/1.5/3 g/kg）。通过疾病活动指数（DAI）、结肠长度、组织病理学评分评估疗效，ELISA法检测结肠组织炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）和氧化应激指标（GSH、MDA），Western blot分析NF-κB通路（p-p65、p-IκBα）和Nrf2/HO-1通路蛋白表达，免疫组化（IHC）观察紧密连接蛋白ZO-1分布，并通过16S rRNA基因测序解析肠道菌群变化。

结果

1. 1.
   AFE缓解UC症状：与模型组相比，AFE中高剂量组显著降低DAI评分（p<0.01），抑制体重下降（p<0.05），并改善DSS引起的结肠缩短（AFE-M: 56.87±5.27 mm, AFE-H: 60.70±8.84 mm, p<0.05）。
2. 2.
   组织病理学改善：H&E染色显示AFE治疗组结肠黏膜结构损伤减轻，杯状细胞和隐窝结构恢复，炎症细胞浸润减少（p<0.05）。
3. 3.
   肠道屏障保护：PAS染色证实AFE增加杯状细胞数量（p<0.01），IHC显示AFE-M和AFE-H组ZO-1蛋白表达显著回升（p<0.05），表明肠黏膜机械屏障功能增强。
4. 4.
   抗炎与抗氧化作用：AFE下调促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平（p<0.01），降低脂质过氧化产物MDA（p<0.01），提升抗氧化酶GSH含量（p<0.05）。Western blot结果显示AFE-H组抑制NF-κB通路活化（p-p65、p-IκBα表达降低，p<0.01），并激活Nrf2/HO-1通路（Nrf2和HO-1蛋白表达上调，p<0.05）。
5. 5.
   肠道菌群调节：16S rRNA测序表明AFE逆转UC小鼠肠道菌群多样性下降（Shannon指数升高，p<0.05），在门水平降低变形菌门（Proteobacteria）和脱铁杆菌门（Deferribacterota）丰度（p<0.05），在属水平抑制Mucispirillum schaedleri等致病菌增殖（p<0.05）。相关性分析显示Mucispirillum schaedleri与DAI评分、炎症指标呈正相关，而Desulfovibrio_R_446353 sp011039135等菌株与结肠长度、GSH呈正相关（p<0.05）。
6. 6.
   功能预测：KEGG和MetaCyc分析提示AFE调控菌群代谢功能，如氨基酸代谢和异生物质降解通路（p<0.05）。

讨论

本研究系统阐述了AFE通过多靶点干预UC的机制：一方面直接抑制NF-κB信号通路减少炎症因子释放，激活Nrf2/HO-1通路缓解氧化应激；另一方面通过调节肠道菌群稳态，抑制致病菌并促进有益菌增殖，间接强化肠道屏障功能。AFE主要活性成分（如柚皮苷、新橙皮苷）的协同作用可能是其疗效的基础。未来需通过成分分离和细胞共培养模型进一步验证直接作用靶点。

结论

枳实提取物通过调控NF-κB/Nrf2/HO-1信号通路、改善肠道菌群失调及增强肠黏膜屏障，有效缓解DSS诱导的小鼠结肠炎，为中药治疗炎症性肠病提供了实验依据。