月经血源细胞外囊泡联合富血小板纤维蛋白：促进全层伤口愈合的新型无细胞治疗策略

《Stem Cell Reviews and Reports》：The Potential of Menstrual Blood-Derived Extracellular Vesicles (MenMSC-Evs) in Combination with Platelet-Rich Fibrin (PRF) as a Biological Adjuvant for Improving Full-Thickness Wound Healing

慢性全层伤口因再生疗法有限和免疫反应而成为临床难题。研究人员探索了月经血间充质干细胞来源的细胞外囊泡（MenMSC-Evs）与富血小板纤维蛋白（PRF）联合应用的协同效应。结果显示，PRF-Evs在体外显著促进细胞增殖迁移（HUVECs增殖29.3%，迁移11.5%），并增强抗菌活性（尤其对金黄色葡萄球菌，p<0.001）；在Wistar大鼠模型中加速伤口闭合23.2%，促进胶原沉积与血管生成（VEGF-A表达提高1.9倍，CD34+微血管密度增加3.1倍），同时调节巨噬细胞极化（降低IL-1β 8.2倍，升高IL-10 3.2倍）。该组合为慢性伤口管理提供了创新的无细胞治疗策略。

　　

全层伤口愈合，尤其是慢性伤口，由于有限的再生疗法和免疫反应，仍然是一个重大的临床挑战。尽管已经提出了不同的基于生物学的联合疗法，但有效且安全的生物佐剂需要进一步研究和开发，以优化其伤口愈合潜力。这项研究探讨了月经血间充质干细胞来源的细胞外囊泡（MenMSC-Evs）与富血小板纤维蛋白（PRF）联合应用对全层伤口愈合的协同效应。在此背景下，首先在体外（n = 3）评估了MenMSC-Evs和PRF对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抗菌功效。评估了MenMSC-Evs对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和NIH3T3细胞增殖和迁移的影响，以确定其对细胞行为的作用。在体内，在九只Wistar大鼠身上建立了全层切除伤口模型，每只大鼠有四个伤口被分配到不同的治疗组，以评估伤口愈合情况。体外实验表明，MenMSC-Evs分别显著增强了HUVECs的增殖和迁移29.3%和11.5%，以及NIH3T3细胞的增殖和迁移24.7%和8.5%（p < 0.01, p < 0.001）。PRF-Evs也显示出改善的抗菌活性，特别是对金黄色葡萄球菌（p < 0.001）。在体内，PRF-Evs加速了伤口闭合23.2%（p < 0.001），增加了胶原沉积（p < 0.001），并促进了血管生成，这通过VEGF-A表达增加1.9倍和CD34阳性微血管密度增加3.1倍来证明（p < 0.001）。此外，PRF-Evs通过减少促炎细胞因子——IL-1β（8.2倍）和TNF-α（4.4倍）——同时上调抗炎细胞因子，包括IL-10（3.2倍）和TGF-β（2.7倍），来调节巨噬细胞极化（p < 0.001）。总之，这些发现表明，MenMSC-Evs和PRF的新型组合通过增强免疫调节、促进新生血管形成和促进组织再生，为慢性伤口管理提供了一种有前景的无细胞治疗策略。

图示摘要概述了从月经血间充质干细胞（MenMSCs）分离细胞外囊泡（Evs）并将其与PRF整合用于伤口愈合的过程。a） PRF从静脉血中提取并随后冷冻干燥。b） 从MenMSCs中提取Evs并接种到PRF上。c） 使用动态光散射（DLS）、透射电子显微镜（TEM）、流式细胞术和蛋白质测定对Evs进行表征，同时通过场发射扫描电子显微镜（FE-SEM）分析PRF-Evs复合物。d） 体外测定评估了MenMSC-Evs对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和NIH3T3成纤维细胞细胞系增殖和活力的影响，同时评估了PRF、MenMSC-Evs和PRF-Evs复合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抗菌作用。e） 通过伤口闭合动力学、组织病理学评估（H&E染色）、血管生成（CD34和VEGF-A）、胶原沉积（Masson三色染色、胶原蛋白I和胶原蛋白III评估）和巨噬细胞极化（CD68表达和细胞因子测定）等指标，分析了PRF、MenMSC-Evs和PRF-Evs复合物对Wistar大鼠伤口愈合的治疗效果。