过硫酸铵诱导的超声波对处于应激适应状态下的大肠杆菌O157:H7的灭活作用分析

《Innovative Food Science & Emerging Technologies》:Analysis of ammonium persulfate-induced ultrasound inactivation of Escherichia coli O157:H7 under stress adaptations

【字体: 时间:2025年10月17日 来源:Innovative Food Science & Emerging Technologies 6.8

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  该研究探讨了硫酸铵-超声协同处理对酸适应、干燥适应和非适应型大肠杆菌O157:H7的灭活效果,发现不同压力适应型菌株的灭活动力学差异显著,并成功应用于生菜清洗系统。

  
作者:Se-Rim Lee | Do-Kyun Kim
韩国首尔国立大学人类生态学院食品与营养系,首尔08826

摘要

本研究探讨了过硫酸铵-超声波(APS–US)处理对不同应激适应型大肠杆菌O157:H7菌株的影响——包括未适应型(NA)、酸适应型(AA)和脱水适应型(DA)。APS–US处理能够协同灭活大肠杆菌O157:H7;然而,灭活效果因菌株的应激适应类型而异,分别实现了超过5.48 log CFU/mL、5.42 log CFU/mL和2.41 log CFU/mL的菌落数量减少。未适应型菌株主要通过硫酸根自由基(SO4•-)被迅速灭活(吸收值为3.42),而酸适应型菌株由于磷脂乙醇胺(PE,0.11?g/L)含量降低和膜刚性增加(FI350/430: 2066.31)导致灭活过程延迟,随后由于羟基自由基(•OH,吸收值为665.57)的贡献增加而表现出更高的敏感性。脱水适应型菌株表现出最高的抗性(菌落数量减少2.41 log CFU/mL),这归因于细胞外类似腐殖物质的自由基清除作用,这些物质在300–450?nm波长范围内具有最高的荧光强度。将APS–US处理应用于被脱水适应型菌株污染的罗马生菜冲洗系统中,可有效将菌落数量减少3.0 log CFU/cm2,同时不会影响产品质量。此外,冲洗液的抗菌活性在多次处理循环后仍得以保持。这些结果表明,应激适应类型通过影响膜组成、自由基吸收和细胞外相互作用,从而影响大肠杆菌O157:H7对APS–US处理的抗性,支持将APS–US作为一种有效且可重复使用的新鲜农产品消毒策略。

引言

确保食品的微生物安全是食品生产中的关键挑战,因为病原体可能在加工、处理和储存的多个阶段造成污染(Frankish et al., 2024; Oluwarinde et al., 2023)。大肠杆菌O157:H7是一种主要的食源性病原体,由于其低感染剂量和在各种环境条件下的生存能力而特别令人担忧(Han et al., 2023; Wu et al., 2022)。与大肠杆菌O157:H7相关的疫情在新鲜农产品、肉类和乳制品中频繁发生,给公共卫生和经济带来了严重负担(Coulombe et al., 2020; Irvin et al., 2021)。
为了降低微生物风险,食品行业依赖传统的灭活方法,如有机酸、过氧乙酸(PAA)和含氯消毒剂(Kalchayanand et al., 2024; Olaimat et al., 2024)。虽然这些方法对多种微生物有效,但其效果常受到有机物质干扰、微生物抗性和不良化学残留物的影响(Liu et al., 2024; Singh & Thakur, 2024)。此外,某些经过应激适应的病原体,包括那些暴露在酸性、碱性或脱水条件下的病原体,会对传统消毒剂表现出更强的抗性,从而降低了这些方法在工业应用中的可靠性(Haberbeck et al., 2017; Kim et al., 2019; Shen et al., 2011)。这些挑战凸显了迫切需要开发不会影响食品质量和安全的广谱抗菌替代消毒策略。
高级氧化过程(AOPs)作为一种有前景的方法出现,因为它们能生成高反应性的自由基,有效灭活微生物的同时最小化化学残留物(Parsons, 2004; Wang et al., 2021)。其中,基于过硫酸盐的氧化系统因能够产生硫酸根自由基(SO4?)和羟基自由基(•OH)而受到越来越多的关注,这两种自由基都对微生物细胞具有很强的氧化作用(Lee et al., 2020; Wang et al., 2018)。
我们之前的研究表明,过硫酸铵(APS)相比传统消毒剂和其他过硫酸盐化合物具有明显优势,因为它能生成高反应性的氧化剂,如硫酸根自由基(SO4?)和羟基自由基(•OH),这些自由基对微生物细胞具有很强的氧化作用(Lee et al., 2024)。此外,APS在浓度高达0.075%的情况下获得了FDA的食品应用批准(FDA, 2018),这凸显了其在安全有效的微生物控制方面的潜力。这些特性使APS成为食品安全应用中微生物灭活的有希望的替代方案。
已经采用了多种方法来增强过硫酸盐的反应性,包括加热、紫外线照射和过渡金属催化(Gujar et al., 2023; Lee et al., 2020; Liu et al., 2018)。超声波(US)常与化学或物理处理结合使用,以获得协同的抗菌效果(Cho et al., 2025; Park & Ha, 2019),并且最近被研究作为激活APS的有效方法(Lee et al., 2024)。这种APS–US组合具有协同效应,提高了消毒效率,优于单独使用传统氧化剂或物理处理。
尽管APS–US处理已被证明有效,但微生物的灭活动态可能因环境应激适应而异。食源性病原体常常会对酸度、脱水和氧化应激等应激因素产生生理变化,从而增强对灭活处理的抵抗力(Kim & Rhee, 2021; Wu et al., 2022)。例如,酸适应型和脱水适应型大肠杆菌菌株表现出膜组成的改变和增强的应激响应机制(Xie et al., 2024; Yan et al., 2024; Yoon et al., 2024)。以往的研究主要集中在APS–US对未适应型细菌菌株的灭活作用上,对于应激适应型病原体如何响应这种处理尚缺乏了解。
本研究旨在探讨APS–US处理对不同应激适应型大肠杆菌O157:H7菌株的影响——包括未适应型、酸适应型和脱水适应型。通过表征自由基在细菌灭活中的作用,我们旨在阐明决定菌株特异性的潜在机制。此外,本研究还评估了膜脂质组成和流动性对APS–US效果的影响,为了解细菌适应如何影响消毒结果提供了见解。这些发现将有助于更深入地理解APS–US作为微生物控制策略的作用,并为针对应激适应型食源性病原体的消毒方法开发提供依据。

部分内容摘录

培养准备

大肠杆菌O157:H7 ATCC 43889菌株来自韩国首尔国立大学的细菌培养收集中心。原培养物在胰蛋白酶大豆肉汤(TSB;MB Cell, Kisan Biotech Co. Ltd., 首尔,韩国)中37?°C培养24?小时后,转移到胰蛋白酶大豆琼脂(TSA;MB Cell)上4?°C培养,并每两周进行一次传代。选择这种经过充分表征的单一菌株是为了确保遗传背景的一致性,以便比较不同菌株之间的灭活差异。

APS–US对细菌的灭活作用

APS–US处理能有效灭活大肠杆菌O157:H7,且在此条件下生成的硫酸根自由基(SO4?)和羟基自由基(•OH)在细菌灭活过程中起着关键作用(Lee & Kim, 2024)。在本研究中,我们特别研究了在APS–US条件下二氧化氮自由基(•NO2)作为次级自由体的潜在形成。如图1所示,•NO2对微生物灭活的贡献得到了明显体现。

结论

本研究证明,过硫酸铵-超声波(APS–US)处理能有效灭活不同应激适应型的大肠杆菌O157:H7菌株。研究结果表明,应激适应通过调节自由基吸收、膜组成和细胞外相互作用改变了细菌的抗性。重要的是,APS–US在多次清洗循环后仍保持抗菌活性,30?分钟后将脱水适应型菌株的菌落数量减少了3.0 log CFU/cm2,同时保持了生菜的颜色。

作者贡献声明

Se-Rim Lee:撰写初稿、数据可视化、实验设计、数据整理、概念构思。 Do-Kyun Kim:撰写修订稿、审稿与编辑、项目资助。

未引用的参考文献

Zhang, Yang, Ji and Lu, 2025

利益冲突声明

作者声明没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文的研究结果。

致谢

本工作得到了首尔国立大学的新教师创业基金的支持。
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