通过TIGIT阻断与肿瘤靶向双特异性抗体增强胰腺癌抗肿瘤免疫

《International Immunopharmacology》：Enhancing anti-tumor immunity through TIGIT blockade and tumor-directed targeting in pancreatic cancer

本研究针对胰腺癌免疫检查点阻断耐药难题，开发了同时靶向TIGIT和CDCP1的双特异性抗体chi2B5×4F11。研究人员通过体外NK细胞毒性实验和人源化小鼠模型证实，该抗体能有效阻断TIGIT-PVR轴、恢复AKT-FOXO1信号通路，并显著抑制肿瘤生长。该研究为克服胰腺癌免疫抑制微环境提供了新型治疗策略。

　　

胰腺癌被称为"癌中之王"，其五年生存率极低，主要原因是肿瘤微环境具有高度免疫抑制特性。传统的免疫检查点抑制剂如PD-1/PD-L1抗体在胰腺癌治疗中效果甚微，这促使科学家寻找新的治疗靶点。TIGIT作为一种新兴的免疫检查点分子，在胰腺癌浸润淋巴细胞中高表达，与配体PVR结合后能抑制免疫细胞功能。与此同时，CDCP1作为一种在胰腺癌细胞表面过度表达的跨膜蛋白，为肿瘤靶向治疗提供了理想靶点。

在这项发表于《International Immunopharmacology》的研究中，研究人员创新性地开发了一种双特异性抗体chi2B5×4F11，该抗体同时靶向TIGIT和CDCP1，旨在将免疫细胞定向募集至肿瘤部位，并在局部解除免疫抑制。研究团队首先通过杂交瘤技术获得了高亲和力的抗TIGIT单克隆抗体4F11，随后将其与抗CDCP1抗体2B5通过基因工程方法构建成双特异性抗体。该抗体采用IgG-(scFv)₂结构，Fc区域经过突变改造以消除效应功能，专注于免疫细胞衔接作用。

研究采用的关键技术方法包括：杂交瘤技术制备单克隆抗体、表面等离子共振(SPR)分析抗体亲和力、流式细胞术检测细胞表面抗原表达、NK-92细胞体外杀伤实验、人脐带血来源CD34⁺造血干细胞构建人源化小鼠模型，以及肿瘤组织内免疫细胞表型分析。

3.1. 筛选高亲和力拮抗性抗TIGIT抗体

研究人员从四种抗TIGIT单克隆抗体(1A10、4F11、4G10和5G4)中筛选出4F11作为最优候选。ELISA和流式细胞术结果显示，4F11对人TIGIT蛋白具有高亲和力(EC₅₀为24.54 ng/mL)，并能有效竞争性阻断TIGIT与PVR的结合。将其人源化改造为chi4F11后，亲和力进一步提高(EC₅₀为95.3 pM)。机制研究表明，chi4F11不仅能阻断TIGIT-PVR相互作用，还能时间依赖性地降低TIGIT蛋白表达，同时恢复AKT-FOXO1信号通路的活化。

3.2. 开发并表征能桥接CDCP1⁺和TIGIT⁺细胞的双特异性抗体chi2B5×4F11

研究团队成功构建了双特异性抗体chi2B5×4F11，其结构为IgG1κ-(scFv)₂，其中chi2B5靶向CDCP1构成IgG骨架，chi4F11靶向TIGIT并以scFv形式融合在重链C端。SPR分析证实该抗体能同时结合CDCP1(KD为3.37×10^?10 M)和TIGIT(KD为1.42×10^?10 M)，并展示出良好的双抗原桥接能力。

3.3. Chi2B5×4F11通过抑制TIGIT增强NK细胞介导的细胞毒性

在NK-92细胞与PANC-1细胞的共培养体系中，chi2B5×4F11在低效靶比(0.01:1)下仍能显著增强细胞毒性作用，而亲本单特异性抗体无此效果。该抗体处理还诱导促炎细胞因子(IL-1β、IL-23等)分泌增加，并上调细胞溶解颗粒相关基因(IFN-γ、穿孔素-1、颗粒酶A和B)的表达。

3.4. TIGIT阻断在人源化PDAC模型中诱导效应细胞重编程并抑制肿瘤生长

在人源化小鼠模型中，chi4F11治疗组肿瘤生长抑制率达64.0%，显著优于chi2B5(43.6%)和chi2B5×4F11(54.5%)。免疫表型分析显示，chi4F11和chi2B5×4F11处理能降低脾脏和外周血中CD4⁺ T细胞和NK细胞的TIGIT表达，同时增加CD226表达。特别是在脾脏中，两种处理均增加了CD226⁺ TIGIT^- PD-1^-细胞比例，表明向效应表型的免疫重编程。

研究结论表明，靶向TIGIT的单特异性抗体chi4F11在体内表现出优异的抗肿瘤效果，主要通过系统性地降低TIGIT表达、恢复CD226介导的共刺激信号来实现。虽然双特异性抗体chi2B5×4F11在体外展示出强大的NK细胞募集和激活能力，但其体内效果受到空间限制和结合亲和力变化的影响。该研究不仅验证了TIGIT作为胰腺癌治疗新靶点的潜力，还为基于双特异性抗体的肿瘤免疫治疗策略提供了重要参考。特别值得注意的是，针对CDCP1的单特异性抗体chi2B5也显示出一定的抗肿瘤活性，提示CDCP1可能通过影响CD6信号通路参与免疫调节，这为未来研究开辟了新方向。

这项研究的创新之处在于首次将TIGIT阻断与肿瘤靶向策略相结合，为克服胰腺癌的免疫抵抗提供了新思路。研究结果支持进一步优化双特异性抗体设计，以提高其在复杂肿瘤微环境中的治疗效果，为胰腺癌患者带来新的希望。