II型干扰素相关蛋白在干燥综合征中的新作用：疾病监测与来氟米特/羟氯喹联合疗法疗效预测的新型生物标志物

《Frontiers in Immunology》：Proteins linked to type II interferon response in Sj?gren’s disease: novel indicators for disease monitoring and predicting treatment response to leflunomide and hydroxychloroquine combination therapy

本研究发现II型干扰素（IFN-γ）相关蛋白（如CXCL10、CXCL11）在原发性干燥综合征（SjD）中显著高表达，来氟米特/羟氯喹联合疗法（LEF/HCQ）可有效下调这些蛋白。这些蛋白不仅能区分患者与健康对照，还能预测LEF/HCQ治疗反应，且单核细胞中I/II型干扰素特征变化与临床疗效相关，为SjD的精准治疗提供了新型生物标志物。

　　

Objective

研究旨在识别能够预测治疗反应、监测疾病活动度的生物标志物和内型，并探索与来氟米特和羟氯喹联合疗法（LEF/HCQ）在原发性干燥综合征（SjD）患者中临床疗效相关的通路。

Methods

研究分析了RepurpSS-I研究中29名SjD患者和8名健康对照（HC）在基线及24周LEF/HCQ治疗后的血清蛋白质组（使用Olink Immuno-oncology panel分析92种蛋白质）。蛋白质组变化与标准及新型临床终点相关联。利用血液单核细胞和单核细胞的转录组数据评估I型和II型干扰素（IFN）评分。

Results

基线时，29种蛋白质在SjD患者与HC之间存在差异表达。LEF/HCQ显著下调了27种过表达蛋白质中的22种，而安慰剂组未观察到此种变化。14种基线蛋白质以及其中四种蛋白质（CXCL10、CXCL11、TNF和可溶性CD70）的变化与临床反应相关（|r| 0.40–0.62, p<0.05）。主成分分析（PCA）揭示了一组与IFN-γ相关的连贯蛋白质。仅使用CXCL10和CXCL11两种蛋白质即可在基线时有效区分患者与健康对照、以及治疗应答者与非应答者（所有p<0.05）。最后，除了I型干扰素特征的变化外，在单核细胞中观察到与疾病活动度变化相关的II型干扰素特征。

Differential protein expression in SjD patients targeted by leflunomide and hydroxychloroquine combination therapy

基线比较显示，与HC相比，SjD患者有29种蛋白质存在差异表达，其中27种过表达，2种（EGF和ANGPT1）低表达。过表达最显著的蛋白质包括CXCL11、CCL19、CXCL10、IL-18、CXCL13和CXCL9。相关性热图显示大多数过表达蛋白质具有一致性。配对分析表明，安慰剂组治疗前后差异表达蛋白质无显著变化，而LEF/HCQ组显著下调了22种过表达蛋白质，其中CXCL11、CXCL10、CXCL9、IL10、LAG3和CXCL13的下调最为显著（log₂FC至少-0.5）。

Baseline proteomic analysis identifies a type II IFN-associated protein identifies predictive of response

PCA分析显示，PC1和PC2共解释了48.75%的方差。对PC1贡献最大的蛋白质包括CXCL11、CXCL9和CXCL10等CXCR3配体。比较HC、非应答者（NR）和应答者（R）发现，对于大多数贡献蛋白，NR的表达水平介于HC和R之间。CXCL10和CXCL11在所有三组间均存在显著差异，联合使用可有效区分三组。PC1与II型干扰素评分显著相关（r = 0.64; p = 2.9e-4），而与I型干扰素评分无显著相关。使用Kirou等人和基因本体生物学过程（GOBP）的替代干扰素特征验证了此结果的稳健性。

Correlation between baseline protein expression and additional clinical outcomes in SjD patients treated with leflunomide/hydroxychloroquine combination therapy

14种基线蛋白质的表达水平与至少一项临床终点（STAR、CRESS、ΔESSDAI或ΔESSPRI）显著相关。其中5种（IL7、MUC-16、ARG1、IL33、VEGFR-2）在R中低于NR，9种（CXCL11、TWEAK、MCP-1、MCP-3、MCP-4、CXCL10、TNF、CCL4、CD70）在R中高于NR。CXCL10和CXCL11的血清浓度与ΔESSDAI、STAR和CRESS评分改善程度相关，水平越高，治疗反应越好。VEGFR-2则与STAR和CRESS负相关。这14种蛋白质与所有临床参数的相关性分析识别出三个簇：第一簇（CD70、CXCL11、CXCL10、TNF）主要与全身炎症变化相关；第二簇（CCL4、MCP-3、MCP-1、MCP-4）与器官特异性参数变化相关；第三簇（IL33、IL7、MUC-16、TWEAK、VEFR-2）与患者报告结局相关。

Association of divergent clinical responses with changes in type II IFN-associated protein component and Type II IFN signatures in monocytes in addition to type I IFN signatures

在14种基线蛋白质中，ΔCXCL10、ΔCXCL11、ΔTNF和ΔCD70的变化与临床终点显著相关。所有四种蛋白质均与CRESS相关。ΔCXCL10和ΔTNF与STAR相关。ΔTNF是唯一与ΔESSDAI显著相关的蛋白质。ΔTNF和ΔCXCL10也与ΔESSPRI相关。在PBMC中，应答者的I型干扰素评分有下降趋势，但II型干扰素评分无组间显著差异。在单核细胞中，安慰剂组、NR和R之间的I型和II型干扰素评分变化存在显著差异。在PBMC中，ΔI型干扰素评分与STAR、CRESS和ΔESSPRI相关，而ΔII型干扰素评分与临床终点无显著相关。在单核细胞中，ΔI型干扰素评分与ΔESSDAI、STAR、CRESS和ΔESSPRI的相关性均强于在PBMC中，且ΔII型干扰素评分也与ΔESSDAI、STAR和CRESS显著相关。使用替代干扰素特征验证了这些关联。

Discussion

本研究证实了II型干扰素相关免疫反应在SjD发病机制中的重要作用，该反应可被LEF/HCQ靶向。CXCL10和CXCL11等II型干扰素相关蛋白具有作为监测疾病活动度和预测治疗反应的生物标志物的潜力。LEF/HCQ对CXCR3配体（CXCL9、CXCL10、CXCL11）以及CXCL13和IL10的强效下调，提示其可能通过抑制T_H1细胞介导的免疫反应、T滤泡辅助细胞（Tfh）和B细胞活性发挥作用。PCA分析揭示的II型干扰素相关蛋白质组分与II型干扰素评分的关联，以及单核细胞中I/II型干扰素特征变化与临床疗效的更强关联，为理解SjD的分子通路提供了新视角。研究局限性包括样本量较小和蛋白质panel的选择偏倚。正在进行的RepurpSS-II和NECESSITY研究将有助于进一步验证这些发现。总之，这些发现为SjD的个性化治疗和生物标志物开发提供了重要依据。