新型PD-L1检测抗体3E2在肺腺癌中的临床评估：与28-8克隆高度一致的低成本替代方案

《BMC Cancer》：Clinical evaluation of a novel-developed clone 3E2 for the detection of PD-L1 expression status in lung adenocarcinoma

本研究针对PD-L1检测成本高、可及性差的问题，开发了新型3E2单克隆抗体。通过免疫组化对比SP263、E1L3N和28-8克隆在101例肺腺癌样本中的表现，发现3E2与28-8具有高度一致性（准确度90.1%，Kappa值0.797），且PD-L1≥5%表达与免疫治疗更好预后相关。这为资源有限地区提供了可靠的PD-L1检测替代方案。

　　

在肺癌精准治疗时代，免疫检查点抑制剂彻底改变了晚期肺腺癌（LUAD）的治疗格局。然而，如何精准筛选可能获益的患者仍是临床面临的重大挑战。程序性死亡配体-1（PD-L1）的蛋白表达水平是目前最广泛使用的生物标志物之一，但其检测却面临着一个尴尬的现实：经FDA批准的检测试剂盒，如Ventana SP263 assay，虽然性能可靠，但高昂的成本极大地限制了其在全球范围内，特别是医疗资源相对匮乏地区的临床应用。这种“检测壁垒”可能导致部分患者错失宝贵的治疗机会。因此，开发一种性能相当但成本更低的PD-L1检测抗体，对于推动免疫治疗的公平可及具有紧迫的现实意义。

在此背景下，Qu等研究人员在《BMC Cancer》上发表了一项研究，旨在评估一种全新开发的小鼠源单克隆抗体——3E2克隆，在检测肺腺癌PD-L1表达状态中的分析性能及其与现有成熟克隆的一致性。研究人员希望通过这项研究，验证3E2抗体能否成为一种可靠的、更具成本效益的PD-L1检测替代方案。

为了回答这个问题，研究团队运用了几个关键技术。首先，他们采用经典的杂交瘤技术制备了30株PD-L1单克隆抗体，并从中筛选出性能最佳的3E2克隆。其次，他们建立了一个包含101例经病理确诊的肺腺癌患者组织样本的队列，这些样本来自山东第一医科大学附属中心医院2018年5月至2021年11月期间接受手术切除或活检的患者，且均未经过术前化疗、放疗或靶向治疗。核心的实验方法是免疫组织化学（IHC），他们在同一批样本上平行对比了3E2抗体与三种商业抗体（Abcam 28-8、CST E1L3N和Ventana SP263）的染色效果。最后，利用统计学方法（如Bland-Altman图、Cohen's Kappa系数）评估一致性，并对接受免疫治疗的晚期患者进行了生存分析，以探讨3E2检测结果与预后的关联。

Preliminary IHC screening of monoclonal antibody of PD-L1

研究团队通过杂交瘤技术成功制备了30株PD-L1单克隆抗体。经过初步的免疫组化筛选，研究人员将候选抗体的染色效果与商业化的Abcam 28-8抗体进行比对，使用的组织包括阳性对照（胎盘）、阴性对照（正常胃粘膜）以及非小细胞肺癌和黑色素瘤患者样本。筛选结果鉴定出两个有前景的候选克隆：3E2和10E2。然而，10E2的结合亲和力显著低于3E2。因此，3E2被选中用于后续的肺腺癌一致性验证实验。

Overall PD-L1 tumor cell expression patterns

研究人员比较了四种抗体（SP263、CST E1L3N、Abcam 28-8和候选的3E2）在所有肺腺癌病例中肿瘤细胞（TC）的表达染色模式。分析发现，与Abcam 28-8和3E2相比，CST E1L3N和SP263在肺腺癌样本中显示出更高的肿瘤细胞阳性染色率。LOESS回归分析生成的最佳拟合曲线进一步阐明了这一趋势。

Consistency analysis of PD-L1 antibody Clone 2E3 with other clones by bland-altman plots

Bland-Altman图用于评估3E2抗体与其他三种克隆（Abcam 28-8、CST E1L3N和SP263）的一致性。与28-8的比较显示平均差异为-0.65，表明偏倚极小，一致性高，大多数数据点落在±1.96个标准差（+12.64和-13.94）的范围内。与E1L3N相比，平均差异为-4.13，表明存在轻微偏倚，但一致性尚可。与SP263的比较显示平均差异为-8.08，表明存在更明显的负偏倚。总的来说，3E2方法与其他方法的一致性水平不一，与28-8的一致性最高，与SP263的一致性最低。

Quantitative consistency analysis of PD-L1 Antibody Clone 2E3 with other clones

通过混淆矩阵和统计测量对3E2与其他三种方法进行定量比较。3E2与28-8的比较显示出高度一致性，总体准确度为90.1%，Cohen's kappa值为0.797，表明具有高度一致性。相比之下，3E2与E1L3N的比较显示出中等一致性（准确度69.8%，kappa值0.401），而与SP263的比较则显示出一致性中偏低（准确度55.4%，kappa值0.262）。

Survival analysis in LUAD patients receiving immunotherapy

对16例接受免疫治疗的III-IV期肺腺癌患者进行的生存分析显示，使用3E2克隆检测，PD-L1表达≥5%的患者比<5%的患者有显著更好的生存率（p=0.021）。使用28-8克隆也观察到类似趋势（PD-L1≥5% vs <5%， p=0.019）。而当阈值设为1%时，两种抗体均未显示出显著的生存差异。这表明PD-L1的预后价值可能因所使用的抗体克隆和表达阈值的不同而异。

综上所述，这项研究得出结论，新开发的PD-L1抗体克隆3E2在评估肺腺癌PD-L1表达状态时，与商业克隆Abcam 28-8具有高度一致性。这种高度一致性，加之其潜在的成本优势（实验室开发测试估计比商业检测成本低30-60%），使得3E2单克隆抗体有望成为评估PD-L1状态的一种有前景且更具成本效益的替代方案。此外，初步的生存分析数据表明，3E2检测到的PD-L1表达（以5%为临界值）对接受免疫治疗的晚期肺腺癌患者的预后具有预测价值，这为其临床效用提供了初步支持。当然，研究的作者也客观指出了其局限性，如样本量相对较小、仅聚焦于肺腺癌、未包含22C3克隆进行比较等。因此，未来需要在更多癌种、更大样本量以及前瞻性临床试验中进一步验证3E2抗体的广泛应用性和其对免疫治疗结局的预测价值。这项研究为降低PD-L1检测门槛、促进免疫治疗更公平可及迈出了坚实的一步。