NAT+/HBsAg-献血者隐匿性乙肝感染的综合评估：确认策略、系列检测结果及S基因突变分析

《BMC Infectious Diseases》：Comprehensive evaluation of NAT+/HBsAg– blood donors: confirmation strategies, serial testing outcomes, and S gene mutations associated with occult HBV infection

本刊编辑推荐：为解决NAT+/HBsAg-献血者感染状态确认难题，研究人员开展了一项综合性研究，通过重复 discriminatory 测试（dHBV）、系列NAT检测和S基因突变分析，发现62.96%的NAT+/HBsAg-献血者被确认为HBV感染，其中68.45%存在漏检现象，且OBI样本在MHR和非MHR区域突变频率显著高于HBsAg+组（P<0.05）。研究表明重复检测可显著提高OBI确认率，为献血者管理提供了重要依据。

　　

在保障血液安全的战场上，乙型肝炎病毒（HBV）始终是最棘手的对手之一。尽管乙肝表面抗原（HBsAg）检测已实施数十年，但一种更隐蔽的威胁——隐匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）正成为输血安全的新挑战。这些感染者体内存在HBV DNA，却因病毒载量极低或抗原变异而逃脱常规检测，如同潜伏的特工，随时可能通过输血传播病毒。

广州血液中心的研究团队发现，随着核酸扩增检测（NAT）技术的广泛应用，NAT阳性但HBsAg阴性（NAT+/HBsAg-）的献血者比例达到0.16%，但如何区分其中的真正感染者和假阳性个案却成为难题。这些献血者的检测结果常常表现出不一致性或波动性，给血液安全管理和献血者权益保障带来双重压力。更棘手的是，不同研究对这类人群中OBI比例的报道存在巨大差异（46.72%-84.5%），这既反映了地区流行病学差异，也暴露出检测方法和确认策略的不统一。

为解决这一难题，研究人员对2019年9月至2020年10月期间的336,537名献血者进行筛查，最终对297例NAT+/HBsAg-个案展开深入分析。他们创新性地采用三重确认策略：常规 discriminatory HBV检测（dHBV）、三次重复dHBV检测（3-repeated dHBV）以及长期系列NAT监测，并结合血清学标志物和S基因测序分析，全面描绘了这类献血者的感染状态和分子特征。

关键技术方法包括：采用Procleix Ultrio Elite Assay进行HBV NAT筛查（检测限4.3 IU/mL）；对NAT+/HBsAg-样本进行常规dHBV和三次重复dHBV检测；通过电化学发光免疫分析法检测HBV血清学标志物；利用专利技术（ZL202111372169.6）从血浆中提取DNA并进行S基因扩增和测序；对195名献血者进行长达13年（2011-2024）的纵向随访数据分析。

确认策略显著提高HBV感染检出率

研究显示，单一常规dHBV仅确认37.71%（112/297）的感染个案，而增加三次重复dHBV后，确认率显著提升至58.59%（174/297）。结合系列NAT检测，总体确认率达到62.96%（187/297），显著高于单一常规dHBV（P<0.01）。维恩图分析表明，三种方法具有互补性：常规dHBV确认112例，重复dHBV新增62例，系列NAT再增13例。这一发现凸显了多重确认策略在提高OBI检出率方面的重要价值。

低病毒载量导致检测不一致性

在187例确认感染者中，仅31.55%（59/187）在四次交叉检测中全部呈阳性，而68.45%（128/187）存在不同程度的漏检。即使在同一样本同一批次进行的三次重复检测中，仍有53.29%（81/152）的结果不一致。这种检测不稳定性极可能源于极低的病毒载量，病毒颗粒遵循泊松分布，导致间歇性检出。

系列NAT检测揭示病毒波动特征

对113例dHBV确认阳性者的长期随访显示，73.45%（83/113）在后续检测中未再出现阳性结果。平均需要进行5.6次检测才能发现一例额外阳性个案。34例OBI献血者表现出明显的间歇性阳性模式，阳性间隔时间从4天到99个月不等。这种波动性反映了OBI的低水平和间歇性病毒复制特性，对制定合理的献血者再入策略提出了挑战。

S基因突变分析揭示OBI分子机制

对49例OBI样本的S基因测序发现，与109例HBsAg+对照组相比，OBI样本在主要亲水区（MHR）和非MHR区域均表现出更高的突变频率（P<0.05）。在基因型B（GTB）中鉴定出9个OBI相关突变，基因型C（GTC）中鉴定出14个，其中E2G、V168A和L175S在两种基因型OBI中均显著富集。

具体而言，GTB OBI的MHR区域氨基酸突变中位数为4个，显著高于HBsAg+组的1个（P<0.01）；GTC OBI的MHR突变中位数为6个，也显著高于对照组的1个。值得注意的是，OBI组MHR区域的突变比例显著高于非MHR区域，而HBsAg+组则相反，提示MHR突变在OBI发生中起关键作用。

研究结论与意义

本研究通过多维度的检测策略和深入的分子分析，证实OBI是NAT+/HBsAg-献血者检测不一致的主要原因。极低的病毒载量和间歇性复制模式导致常规检测方法难以可靠识别感染状态。重复检测和长期监测可显著提高确认率，为优化献血者管理提供了实证依据。

针对献血者再入策略，研究指出仅依靠一两次阴性随访检测不足以排除OBI风险，建议采用更严格的再入标准，包括增加检测频次、结合HBcAb检测等。同时，鉴定出的关键S基因突变（如E2G、V168A、L175S）为开发高灵敏度检测试剂和深入理解OBI机制提供了重要靶点。

这项发表于《BMC Infectious Diseases》的研究不仅为血液安全管理提供了实践指南，也为OBI的病原学研究贡献了新的分子见解，对全球范围内减少输血传播HBV风险具有重要参考价值。