实验感染绵羊粪便与胆囊来源肝片形吸虫卵存活率的比较分析

《Veterinary Parasitology》：Comparative analysis of the viability of Fasciola hepatica eggs collected from fecal and gallbladder samples in experimentally infected sheep

本研究发现，在实验感染绵羊中，粪便来源的肝片形吸虫（Fasciola hepatica）卵存活率（92.5%）显著高于胆囊来源（33.2%），并通过虫卵孵化试验（EHA）证实该差异具有统计学意义（P<0.0001）。研究建议在疫苗试验或杀虫剂评估中优先采用粪便样本进行吸虫卵存活率检测，为肝片形吸虫病防控策略提供了重要实验依据。

　　

实验动物

用于获取粪便和胆囊样本的动物来自先前报道的一项受控疫苗接种和感染实验（Ortega-Vargas等人，2019年）。研究使用了雄性绵羊（6-8月龄，卡塔丁×东弗里生杂交种）。绵羊根据其发育阶段饲喂干草和商业饲料。这些羊被饲养在带有水泥地面的圈舍中，采用集约化生产系统，地点位于墨西哥普埃布拉特卡马查尔科贝尼托华雷斯自治大学兽医与动物科学学院的动物生产与健康教学、研究和推广中心。

粪便与胆囊来源肝片形吸虫卵存活率的比较分析

通过虫卵孵化试验分析了实验感染绵羊体内肝片形吸虫卵的存活率，采用了推荐的时间和温度条件（Chryssafidis等人，2015年）。

当比较所有绵羊（n=25）的粪便和胆囊来源虫卵的存活率时，发现粪便样本中的虫卵存活率高于胆囊。粪便样本中活卵的百分比为92.5%，而胆囊来源的为33.2%（P<0.0001；图2）。

为确保疫苗接种试验中观察到的虫卵存活率差异不受样本来源影响，我们比较了不同组别（G1-G5）粪便和胆囊样本的虫卵存活率。在粪便样本中，G3组（400 μg）的虫卵存活率（67%）显著低于感染对照组G5（88%）（P<0.001）。在胆囊样本中，G3组的虫卵存活率（22%）也显著低于G5组（59.6%）（P<0.05）。这些结果表明，疫苗接种（尤其是G3组）影响了虫卵的发育，且这种影响在两种样本来源中均能检测到，但粪便样本检测到的差异更为显著。

讨论

本研究评估了实验感染绵羊体内肝片形吸虫卵的发育是否会因其采集部位（粪便来源或胆囊来源）而异，并通过虫卵孵化试验进行了验证。当分析所有绵羊的两种来源虫卵时，观察到粪便来源的虫卵存活率（92.5%）高于胆囊来源（33.2%）。

为了比较这些结果并排除因疫苗接种试验设计可能带来的偏差，我们分析了不同实验组（G1-G5）的虫卵存活率。结果显示，与感染对照组（G5）相比，接种400 μg嵌合蛋白（rFhLAP-CL1）的G3组，其粪便和胆囊样本中的虫卵存活率均显著降低。这表明疫苗接种（特别是高剂量）可能影响了寄生虫的生殖生物学或虫卵的成熟过程。

胆囊环境（如胆汁成分、pH值）与肠道环境存在显著差异。虫卵从胆囊排出到粪便的过程中，经历了一系列物理化学变化（如温度、湿度、pH值、氧气浓度），这些变化可能触发了虫卵内 miracidium（毛蚴）发育所需的转录组和蛋白质组变化（Ilgová等人，2022年）。胆囊内的条件可能不足以支持虫卵完全成熟，或者某些虫卵在胆囊中可能已经退化，从而导致胆囊来源虫卵的孵化率较低。相反，排入肠道的虫卵暴露于更有利于其发育和孵化的环境中。

这些发现对基于虫卵存活率评估的肝片形吸虫病研究（如疫苗效力试验或杀虫剂抗性监测）具有重要意义。研究表明，在类似实验中，选择粪便样本进行虫卵孵化试验可能更可靠，因为它能更准确地反映虫卵在自然环境中的实际存活潜力。使用胆囊样本可能会低估虫卵的存活率，从而可能影响对干预措施（如疫苗或药物）效果的解读。

总之，本研究强调了样本来源对肝片形吸虫卵存活率评估结果的关键影响，并建议在未来的疫苗试验或杀虫剂评估中优先使用粪便样本进行虫卵孵化试验，以获得更一致和具有生物学意义的数据。