基于多重重组酶聚合酶扩增结合侧向流免疫层析技术同步检测五种碳青霉烯酶基因的新型现场快速诊断平台

《Clínica e Investigación en Arteriosclerosis》：Detection of carbapenemase genes by multiplex recombinase polymerase amplification combined with lateral flow immunochromatographic strips

本文开发了一种多重重组酶聚合酶扩增（mRPA）结合侧向流免疫层析（LFS）技术，可同步检测blaKPC、blaNDM、blaOXA-48、blaVIM和blaIMP五种碳青霉烯酶基因。该平台在40分钟内实现102 CFU/mL检测限，灵敏度98.2%、特异性100%，无需复杂设备，为基层医疗和床旁检测（POCT）提供精准快速的碳青霉烯耐药肠杆菌（CRE）诊断方案。

　　

亮点

样本收集

本研究共收集66株临床菌株，其中56株为碳青霉烯酶阳性且对碳青霉烯类抗生素耐药，10株为碳青霉烯酶阴性且对碳青霉烯类抗生素敏感。所有样本经培养后均通过普通聚合酶链反应（PCR）进行鉴定（补充材料1），样本来源于安徽省公共卫生临床中心。

碳青霉烯耐药基因快速检测方案

为实现现场快速诊断，我们设计了完整的检测流程，包括核酸提取、引物用量优化和侧向流层析（LFS）结果判读。采用三对核酸检测（NAT）引物同步检测blaKPC、blaNDM和blaVIM的DNA模板，另采用两对NAT引物检测blaIMP和blaOXA-48。通过分子杂交技术，该平台可在水浴或金属浴中40分钟内完成五种碳青霉烯酶基因的可视化检测。

讨论

细菌耐药性是微生物对外界压力的一种适应性进化反应，已成为人类感染性疾病领域的重大挑战。多重耐药（MDR）菌株甚至全耐药菌株的出现对人类健康构成严重威胁。碳青霉烯类作为非典型β-内酰胺抗生素，具有广谱抗菌活性，是治疗多重耐药菌感染的最后防线。本研究开发的mRPA-LFS平台通过分子杂交实现多靶点同步检测，突破了传统抗体标记法的环境敏感性限制，为耐药基因检测提供了新技术路径。

结论

本研究成功构建了一种高灵敏度（10² CFU/mL）、高特异性（100%）的碳青霉烯酶基因诊断平台。该技术无需复杂仪器，适用于基层医院和床旁检测场景，为临床早期诊断和精准用药提供了创新解决方案。