新型脑脊液前处理方案下Elecsys免疫检测中阿尔茨海默病生物标志物的样本稳定性研究

本综述系统评估了新鲜脑脊液（CSF）样本中Aβ42、p-tau181和t-tau三种阿尔茨海默病（AD）关键生物标志物在不同储存条件（15–25°C、2–8°C、-25°C至-15°C）下的稳定性。研究证实，采用Elecsys?免疫检测配套的低吸附管和前处理方案可显著提升标志物（尤其是易降解的Aβ42）的稳定性，为临床AD精准诊断提供标准化预分析路径。

　　

1 背景

阿尔茨海默病（AD）作为一种进行性、不可逆的神经退行性疾病，是痴呆症的主要病因，占所有病例的60%–80%。其典型病理特征为脑内β-淀粉样蛋白（Aβ）斑块沉积和tau蛋白过度磷酸化形成的神经原纤维缠结。研究表明，脑脊液（CSF）中可溶性Aβ寡聚体和tau蛋白水平与认知衰退高度相关，因此Aβ和tau被确立为AD诊断的关键生物标志物。其中，Aβ₄₂与脑内淀粉样斑块负荷呈负相关，磷酸化tau（p-tau181）和总tau（t-tau）分别反映tau蛋白缠结和神经元退化。近年来，疾病修饰疗法（如lecanemab和donanemab）的出现凸显了早期精准诊断的迫切性。

Elecsys?系列免疫检测（包括Aβ₄₂ CSF II、p-tau181 CSF和t-tau CSF检测）基于电化学发光双抗体夹心原理，已获欧美临床批准应用。这些检测具有高精密度、低变异度等优势，并与淀粉样蛋白正电子发射断层扫描（PET）结果高度一致。然而，生物标志物（尤其是易吸附聚集的Aβ₄₂）的稳定性受前处理因素（如储存时间、温度、冻融循环）显著影响。为此，本研究基于厂商推荐的新型前处理方案（使用低吸附管、优化样本体积），系统评估新鲜CSF样本在Elecsys检测中的稳定性。

2 方法

2.1 研究设计

研究前瞻性纳入≥50岁、接受腰椎穿刺的AD评估患者，采集CSF样本后直接分装至5支2.5 mL低吸附假底管中。样本在15–25°C下静置≤6小时后进行基线（T0）检测，随后按实验分组储存：室温组（15–25°C）储存1–8天，冷藏组（2–8°C）储存1–15天，中期冷冻组（-25°C至-15°C）储存5–15周。冻存样本检测前于20–25°C解冻30分钟，并滚动混合20分钟。

2.2 样本检测与统计分析

采用Elecsys免疫检测平台测量Aβ₄₂、p-tau181和t-tau浓度。短期稳定性通过普通最小二乘法（OLS）线性回归分析回收率（随访浓度/基线浓度×100%），若斜率显著（p < 0.05），则以90%回收率对应的95%单侧置信区间上限作为最大允许储存时间。中期稳定性采用Passing-Bablok回归分析冻融效应，设定斜率1.00 ± 0.07、偏差±7%为可接受标准。

3 结果

3.1 检测性能与样本特征

所有检测均符合质控要求，基线测量变异系数低（Aβ₄₂中位数1.39%）。共纳入69例患者，平均年龄67岁，MMSE评分23–26。

3.2 短期稳定性

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  室温储存（15–25°C）：Aβ₄₂回收率随储存时间显著下降（斜率-0.791%/天，p < 0.001），第8天时部分样本回收率<90%；p-tau181与t-tau稳定性良好（斜率分别为-0.408%与-0.501%），8天内回收率均>93%。
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  冷藏储存（2–8°C）：所有生物标志物15天内均稳定（斜率无统计学意义），回收率维持在93%–105%之间。

3.3 中期稳定性

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  冻存5–8周：Aβ₄₂、p-tau181和t-tau均保持稳定（斜率0.996–1.000），Aβ₄₂偏差为-2.84%（95% CI -5.00至-0.389）。
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  冻存12–15周：p-tau181与t-tau仍稳定（偏差<1%），但Aβ₄₂出现系统性下降（偏差-5.00%，约30%样本回收率<90%）。

4 讨论

本研究首次基于Elecsys免疫检测配套前处理方案，明确了新鲜CSF样本的优化储存条件：Aβ₄₂在室温（15–25°C）下宜储存≤5天，冷藏（2–8°C）下≤15天，冷冻（-25°C至-15°C）下≤8周；p-tau181与t-tau稳定性更佳，可耐受更长时间储存。Aβ₄₂的不稳定性与其易聚集特性相关，而低吸附管与满管储存有效减少了吸附损失。值得注意的是，尽管单个标志物可能受储存条件影响，但临床常用的比值指标（如p-tau181/Aβ₄₂）对偏差的耐受性较强，保障了诊断稳健性。

4.1 局限性

样本量虽符合稳定性研究常规，但不足以分析年龄、共病等因素的影响；未探索-80°C深冻或>15周储存的效应。未来需针对极端温度与长期储存开展延伸研究。

结论

本研究为Elecsys免疫检测的临床标准化应用提供了关键前处理依据，通过优化储存方案最大程度保持生物标志物稳定性，助力AD的早期精准诊断。