蜥蜴（Gekko gecko）听觉脑干组织研究：外侧丘系核与半规管隆凸核的传入与传出投射

《Journal of Comparative Neurology》：Organization of the Auditory Brainstem in a Lizard, Gekko gecko. II. Afferent and Efferent Projections of Nuclei of the Lateral Lemniscus and the Torus Semicircularis

本综述深入探讨了蜥蜴（Gekko gecko）听觉脑干中高阶核团——外侧丘系核（LLD）与中脑半规管隆凸中央核（TSC）的组织结构与神经连接。研究揭示了其从蜗核（NA/NL）和上橄榄核（SO）接收上行输入，并投射至丘脑听觉核团（Med）的完整通路。通过神经束路追踪与电生理记录，文章详细描绘了TSC腹侧区（TSCv）与背侧区（TSCd）在频率处理上的功能分化，为理解四足动物听觉系统的演化保守性与生态适应性提供了关键解剖学证据。

　　

1 引言

环境声音传递了声源位置与生物学意义的信息。相应地，听觉处理以服务于声音定位与识别的神经回路为特征。在鸟类与哺乳动物中，这两个过程主要由独立但重叠的神经通路执行。然而，在其他脊椎动物中，关于声音定位与识别的并行处理知之甚少。因此，本研究描述了一种发声蜥蜴——大壁虎（Gekko gecko）的解剖连接。许多壁虎会发出响亮、刻板的叫声，这意味着其长距离通讯需要准确的声音定位与识别。

在四足动物中，鼓膜听觉在通向现代两栖动物、爬行动物和哺乳动物的谱系中多次进化。听觉处理的神经回路已在青蛙、鸟类（如雀、鸡和仓鸮）和哺乳动物（包括蝙蝠、小鼠和沙鼠）等模式动物中得到广泛研究。这些动物具有可比的上行神经回路，揭示了一种共同的八阵模式组织，包括延髓中的单耳与双耳核团、多个延髓投射在中脑听觉区的汇聚以及声源定位特异性的增加。这些不同谱系间的共同特征与听觉处理的祖先“模板”一致。

系统发育对听觉系统的限制可能构成了听觉通路的基本组织，而生态适应则促进了听觉核团与连接的多样化。例如，所有爬行动物，包括鸟类和蜥蜴，都有两个蜗核——巨细胞核（NM）和角状核（NA），但内耳组织方式不同。在有鳞类动物中，进化出了内耳的特化高频最佳频率区域，这与角状核（NA）内的高频和低频最佳频率细分相关。在迄今研究的四足动物——青蛙、鸟类和哺乳动物中，听觉丘系核和半规管隆核的细分似乎是并行分化的，具有不同的神经支配模式。这些复合体的解剖结构在有鳞类分类群中仍然 largely unknown。因此，对壁虎听觉核团及其连接的研究应能揭示脊椎动物听觉系统的演化。

蜥蜴的发声交流主要见于壁虎。雄性壁虎对雄性和雌性发出不同的叫声，雌性亦然。个体在繁殖季节可形成两种类型的二重唱。因此，该物种可能是研究涉及声音定位与呼叫识别的高阶听觉通路结构与连接的模型。在先前的研究中，我们使用束路追踪技术揭示了大壁虎听觉脑干的连接。本文则研究了外侧丘系核与半规管隆凸核的传入与传出投射，并在电生理记录后使用神经束路追踪。

2 方法与材料

研究使用成年大壁虎（Gekko gecko）。所有程序均经马里兰大学学院帕克分校动物护理与使用委员会批准。数据来自我们先前论文中描述的案例和四个新案例。所有案例使用相似的组织处理、数据收集和图像制备方法。

2.1 麻醉、手术与生理记录

为了注射束路追踪剂，壁虎在混合异氟烷与室内空气的小室中预麻醉约10分钟。然后，将连接蒸发器和氧气瓶的小塑料管松散插入气管，通过提供3%的异氟烷用于手术和1%用于记录来维持麻醉。实验在隔音室中进行，壁虎通过反馈探针控制的加热毯维持在25°C左右。头部通过将不锈钢头柱粘在前额骨上保持恒定位置；定制的声音系统包含商用微型耳机和微型麦克风，并使用Gold Velvet II材料密封到双耳的耳道入口；对声音系统进行校准。通过背侧开颅术暴露中脑。必要时，在中脑与小脑之间插入小探针以访问隆凸的尾部部分。生理记录使用20兆欧钨微电极进行，随后使用含示踪剂的玻璃微电极记录。每次穿刺的最佳频率通过测量 spike rate 随频率变化（等电平响应曲线）从100 Hz到5 kHz，以100至250 Hz为步长得出。生理记录后，离子电渗入生物素化葡聚糖胺（BDA）或神经生物素。壁虎在处死前在其家笼中恢复1-4天。灌注时，动物肌肉注射Euthasol。处死后，对壁虎进行灌注。取出脑部，进行冷冻保护并切片。注意，染料扩散和缺乏单细胞分辨率限制了对生理数据的解释。

切片在亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）中孵育，示踪剂通过辣根过氧化物酶底物试剂SG kits可视化。对于神经生物素注射，使用类似程序，切片用ABC试剂处理。使用标准尼氏协议对切片进行复染色。标记的神经元、轴突和末梢以及每个核团的轮廓，使用连接到显微镜的计算机软件（Neurolucida）进行拍照和绘制。使用Zeiss 710共聚焦显微镜拍摄荧光标记切片。使用ImageJ手动选择和圈定目标区域来测量标记末梢，计算其面积。使用Neurolucida系统手动计数部分重建的染色轴突以识别束路，以及所有标记的神经元和末梢。

2.2 快速高尔基法

对三只壁虎使用改良的Golgi-Cox技术。动物用氯胺酮麻醉，随后注射致死剂量的戊巴比妥。取出脑部并置于含重铬酸钾、氯化汞和铬酸钾的高尔基固定液中，然后在横切面切片。

2.3 数据分析

通过结合标记扩散、记录深度和物理位置的观察来确定注射位点位置。使用密集标记的神经元和神经毡来确认注射位点。幸运的是，除SOd外，大多数听觉结构都位于脑的背侧或腹侧表面附近，有助于定位。注射位点局限于特定结构的支持是，无论大小注射都产生定性地相似的前行与逆行结果。使用计算机软件（Neurolucida）连接到显微镜（Olympus BX60）对标记的神经元、轴突和末梢以及每个核团的轮廓进行拍照和绘制。使用Zeiss 710共聚焦显微镜拍摄荧光标记切片。使用ImageJ手动选择和圈定目标区域来测量标记末梢。部分重建染色轴突以识别束路，并使用Neurolucida系统手动计数所有标记的神经元和末梢。

3 结果

我们先前已显示听觉神经投射至NA和NM，且NM双向投射至NL。这些核团接收来自上橄榄核（SO）的下行连接。本文描述了NA、NL和SO向丘系核与听觉中脑的上行投射，并揭示了听觉中脑的连接，包括向丘系核的下行连接和向丘脑的上行投射。

3.1 听觉核团的组织

对脑干、中脑和丘脑的切片用甲酚紫复染色，纤维束用固蓝染色，使我们能够识别出位于吻侧脑干与丘脑之间的三个听觉群。这些是背外侧丘系核（LLD）、半规管隆凸中央核（TSC）和丘脑内侧核（M）。

外侧丘系核位于外侧与吻侧后脑，介于橄榄核与TS之间，并在TS腹侧形成复合体。该复合体还包括一个位于LLD尾侧和腹侧的核团——腹侧上橄榄核（SOv）。LLD被脊髓丘系 thick axons 和外侧丘系纤维包围，轴突密度在脑干外侧边缘最大。LLD有三个细分，基于位置、神经元形状和大小。一个圆形的前部包含最大的神经元（LLDa），位于后部（LLDp）的前方和背外侧，后者具有较小的神经元。这些细分先前已在使用钙结合蛋白和谷氨酸脱羧酶抗体的免疫组织化学材料中被识别。第三个细分，被识别为LLDa和LLDp内侧的一小群神经元，未显示清晰边界或神经元簇，但可在束路追踪实验中识别（LLDm）。

Kennedy和Browner将大壁虎的半规管隆凸分为中央、板层和浅表核。中央核（TSC）构成TS的主要部分，板层核在吻侧水平在TSC内侧和背侧形成一个帽。与Kennedy和Browner相反，我们未观察到板层核的清晰尾侧延伸，其被描述为环绕尾侧TSC。浅表核位于中央核的背侧和背外侧，并通过白质束与TSC分离。先前研究及我们的数据均不支持板层核或浅表核的听觉作用，因此我们专注于本研究中的TSC。

在大壁虎中，TSC很大，占据尾侧、背侧中脑的大部分。尾侧，它在中线处融合，更吻侧时，分叉形成 tectal ventricles 下方的椭圆形轮廓，其尺寸向吻侧中脑减小。我们将TSC分为两个亚区——背侧（TSCd）和腹侧（TSCv）。我们先前曾使用钙结合蛋白表达的空间模式将壁虎TSC分为三个亚区——外侧、腹侧和背侧。在本研究中，我们将外侧和腹侧分区合并为一个腹侧分区，并将在此显示上行脑干投射汇聚于此腹侧分区。

尾侧，腹侧和背侧分区都在中线处与对侧同源结构相邻。两个细分在高尔基染色材料中可区分，因为腹侧分区的神经毡与周围区域不同。在高尔基材料中，腹侧和背侧细分在尾侧隆凸中分化更明显，并在TSC位于 tectal ventricle 下方的吻侧切片中变得不太明显。与Kennedy和Browner的结果一致，纺锤形神经元数量众多，并在两个亚区中均匀分布。球形细胞也遍布中央核，但在高尔基材料中较少见。背侧细分中 impregnated 的神经元少于中央核的其余部分。

3.2 来自脑干蜗核的上行投射

注射到NA和/或NM/NL的示踪剂标记了外侧丘系中的轴突以及丘系核和TSC中的末梢，几乎 exclusively 在腹侧分区（TSCv）。向丘系核的投射是双侧的，而向TSC的投射则偏向对侧。

一个包括NM、NL和NA的背内侧听觉结节的大注射（GG157）产生了双侧标记的丘系纤维。如Tang等人报道，这些注射在同侧SOd和SOv中产生了逆行标记的神经元，并在双侧SOd和SOv中产生了末梢野。大多数上行纤维行经SOv外侧，靠近脑表面，并在同侧LLDp和LLDa中形成密集的末梢野。对侧丘系纤维位于外侧丘系中更内侧的位置，也终止于LLDp和LLDa。上行轴突继续向吻侧行进，并跟随一条靠近巨细胞isthmic核外侧边缘的纤维束，终止于TSCv的外侧部分。在同侧和对侧LLD中观察到相似程度的神经支配。与同侧相比，在对侧TSCv中发现了更多密集标记的轴突和末梢。单独注射到NA的小注射（GG149）产生了与GG157相似的标记纤维和末梢模式。标记了NM/NL但排除NA的小注射（GG107, GG155）在双侧LLDp中产生了少量纤维和末梢染色。我们的伴随报告显示，NM双向投射至NL，同侧投射至NL背侧神经毡，对侧投射跨中线至NL神经元的腹侧树突。由于NL较小且靠近NM，注射到NL会扩展到整个NM/NL区域。

TSC的大注射（GG80）以及两个较小注射，一个在吻侧TSC（GG119），一个在尾侧TSCv（GG156），在对侧NA中产生了逆行标记的细胞。大注射（GG80）也标记了对侧NL神经元。这证实了前行标记的结果，表明NA/NL的接收区可能沿TSC的吻尾轴分布，并主要位于尾侧水平的 lateral TSCv。局限于TSCd的小注射未标记脑干蜗核中的细胞。逆行标记支持我们的观察，即从听觉结节到TSC的投射主要是对侧的。

3.3 来自上橄榄核的上行与 reciprocal 连接

壁虎有两个上橄榄核，一个背侧，一个腹侧。两个核都形成吻尾导向的细胞柱，腹侧核（SOv）起始于 just caudal to LLD，并延伸至一级核的水平。SOd范围更受限。SOd和SOv都投射至LLD和TSC。

注射到SOd（GG163；注射位点）显示了对侧TSCv中的轴突和末梢。在TSC注射后也发现了类似连接，SOd中的逆行标记细胞主要在对侧。此外，SOd注射在双侧LLDp和LLDm中产生了标记的纤维和末梢，LLDp比LLDm含有更多标记的轴突和末梢。向LLDa的投射稀疏。

注射到SOv（GG166, GG167）显示有限的染料传输，仅在同侧LLD中产生少量纤维。然而，LLD的大注射逆行标记了双侧SOv中的细胞，表明SOv与LLD之间存在连接。TSC的大注射和TSCv的小注射逆行标记了SOv中的细胞，细胞主要在同侧。所有TSC注射都在SOv中产生了逆行标记的细胞，而只有一些注射标记了SOd中的细胞。在SOv和SOd都被标记的案例中，SOv中的标记细胞多于SOd。

TSC注射也标记了SOv中的末梢，主要在同侧，表明存在 reciprocal 连接。值得注意的是，TSCd的小注射（GG42）在SOv中产生了标记的末梢。未发现从TSC到SOd的下行投射。

3.4 来自LLD的上行与 reciprocal 投射

TSC接收来自LLD的投射。TSC的大注射（GG80）逆行标记了双侧LLD所有细分中的细胞体。TSC吻侧的小注射（GG119）产生了类似结果。另外三个TSCv的小注射（GG78, GG137, GG153）仅标记了同侧LLD中的细胞，对侧几乎没有可辨别的纤维。局限于TSC最尾端尖端、标记了许多NA细胞体的注射，未逆行标记LLD中的细胞。此外，LLD的大注射（GG117）标记了其对侧同源结构中的细胞。

TSC和LLD是 reciprocally 连接的。LLD注射（GG117）前行标记了TSC中的细胞。在横切面中，细胞体遍布TSC，包括TSCd，这是一个几乎未接收来自蜗核上行输入的区域。吻侧TSC中的标记细胞体比尾侧TSC更多。相反，在TSCv和TSCd注射后，可在LLD中看到标记的末梢。与从LLD到TSC的上行投射相似，下行连接在同侧也更显著。对于双侧，TS与LLD各亚核之间的连接强度在LLDa和LLDm之间似乎很强，而在TS与LLDp之间较弱。

3.5 TSC的额外投射

来自听觉结节和SOd的上行投射几乎 exclusively 终止于TSCv。TSCv也与TSCd形成 reciprocal 连接。在TSCd吻侧部分的小注射（GG42）中，标记的纤维向腹侧、尾侧和正交方向行进，以终止于双侧TSCv。相反，局限于TSCv的注射在TSCd中产生了标记的细胞和末梢。我们所有的TSC注射都在同侧半规管隆凸浅表核（TSS）中产生了标记的末梢。虽然在某些案例中这可能是染料扩散的结果，但在一次注射中，我们仅标记了TSCv的内侧部分（GG137），仍然在同侧TSS中观察到末梢，支持从TSC到TSS的投射存在。

在间脑中，TSC投射至同侧丘脑内侧核。丘脑内侧核形成一个三角形核，位于 nucleus rotundus 的腹内侧，紧贴第三脑室。TSC的大注射（GG80）产生了许多填充丘脑内侧核的纤维和末梢，而较小的注射（GG78）在同侧丘脑内侧核中显示了密集的末梢野。在尾侧丘脑中，一些染色轴突在 tractus opticus lateralis 中成簇发现，位于吻侧顶盖下方外侧。

3.6 TSC的生理组织

此处提出的解剖学观察得到了对注射位点进行电生理 mapping 的支持。上述描述的注射与七只壁虎隆突中染料填充电极的多单位记录相结合，这些实验的结果将在此简要报告，以阐述TSC的组织。对空气传播声音的神经元反应在隆凸的背侧和腹侧部分之间不同。对 tonal stimuli 的显著反应主要发现在TSCv，与该区域接收来自听觉结节、上橄榄和丘系核的上行输入一致。TSCv区域也由 parvalbumin 免疫反应性细胞体和上行 calretinin 阳性轴突和末梢 delineated。

来自染料填充电极的记录显示，TSCv的反应最佳频率为300–3000 Hz。TSCv内侧的一个记录位点（GG137）显示随深度系统性的 tonotopic 变化，在1 mm的记录深度内，最佳频率从200 Hz移至1200 Hz。TSCv的其他记录揭示了最佳频率的斑块状分布，注射位点的最佳频率范围从390 Hz（GG156）到1400 Hz（GG153）。在尾侧和吻侧TSCv之间，最佳频率也存在类似的斑块状分布——即三个吻侧TSCv注射位点的最佳频率范围从390到1450 Hz。除GG137案例外，我们未观察到最佳频率的系统性变化。未来的研究可能会将TSCv划分为接收来自不同脑干位点输入的区域。

在TSCd中，记录（GG80, GG116）通常显示宽阔或多峰的调谐曲线。GG80记录显示整个TSCd的背腹范围内最佳频率 around 400 and 1900 Hz，而GG116记录位点具有500 Hz的低频峰值和1400 Hz的第二个峰值。TSCd中的其他记录以宽阔的调谐曲线为特征。

为了表征在染料注射位点观察到的 varied tuning，我们对单只壁虎TSC中的频率响应进行了系统回顾。最佳频率使用双耳刺激测量，在0 μs ITD和75 dB下，通过中脑的10次背腹穿刺以100 μm间隔进行。在穿过视顶盖后，在10次穿刺中的4次在尾内侧中脑（灰色圆圈）中观察到听觉反应，对应于图中的TSC位置。多单位听觉反应最初在距视顶盖表面1300至2200 μm的深度遇到。最初，遇到微弱、宽阔调谐的反应，与TSCd中的其他记录一致。随后，在所有四次听觉反应穿刺（灰色圆圈）中，在约2 mm深度处对 around 300–400 Hz 的刺激产生强烈反应，之后更腹侧的记录对听觉刺激没有进一步反应。TSC腹侧三分之一的强烈反应与来自后脑蜗核的上行投射终止于TSCv一致。

3.7 来自丘系核与橄榄核的听觉连接总结

我们汇编了20只动物的数据，以生成图中的连接摘要。NL和NA双向投射至LLD。NA投射至LLDa和LLDp，NL投射至LLDp。分别标记NA和NL的注射很小，它们的投射很弱，因此NA和NL投射之间的差异不是决定性的。NL和NA主要在对侧投射至TSCv。在另一项研究中，我们发现后脑 saccular 核（VeO）终止于TSC中更背侧的位置。来自听觉结节（NA/NL, VeO）的终止模式反映了TSC中 calretinin 阳性纤维的分布，VeO投射位于最尾侧TSC和TSCd中的一个小区域。来自NA/NL的投射终止于最尾侧TSC，并在TSCv中向吻侧延伸。

SOd和SOv都双向投射至LLD。SOd投射至LLDp和LLDm，从SOd到TSC的投射主要在对侧。来自SOv的投射主要在同侧。LLD与TSC之间的上行和下行连接主要在同侧。该连接强度在LLDa和LLDm中很强，但在LLDp中较弱。还有从TSC到同侧SOv的下行投射。在可区分细分的TSC区域中，来自后脑蜗核的上行投射主要局限于TSCv。追踪结果和注射位点记录的最佳频率不足以解析NA/NL、SO和LLD的上行投射是分离成微域还是相互混合。相比之下，下行投射似乎起源于TSC的所有区域。

TSC通过 tractus opticus lateralis 投射至同侧浅表核（TSS）和同侧丘脑听觉内侧核。结果揭示了蜥蜴和 archosaurs 中脑干听觉连接的保守模式。

4 讨论

蜥蜴的上行听觉通路类似于 well-described 的哺乳动物和鸟类听觉通路，从第八神经中的一级神经元水平到端脑。Foster和Hall首先在绿鬣蜥（Iguana iguana）中描述了这些通路，我们在大壁虎中观察到了相似且更多分化的连接。大多数壁虎是夜间捕食者，使用发声进行种内通讯，一些物种使用响亮（长距离）叫声，其他使用安静叫声（短距离）。因此，壁虎拥有发育良好的听觉核团并不奇怪，包括具有清晰细分的大型中脑半规管隆凸和复杂的上橄榄系统。

4.1 蜥蜴脑干中的听觉通路

在双孔类中，上行听觉回路的组织最常在鸟类中得到研究。在该类群中，听觉神经投射至两个蜗核——巨细胞核（NM）和角状核（NA）。NM投射至同侧背侧和对侧腹侧NL，提取NM中的相位锁定时间信息并在NL中进行比较。NL和NA主要投射至对侧橄榄核、丘系核和听觉中脑，称为下丘核，也称为半规管隆凸和背中脑核。鸟类和蜥蜴听觉系统的主要差异可能源于蜥蜴内耳的独特组织。在蜥蜴进化过程中，原始乳头被认为由三个毛细胞区域组成。中央（祖先）毛细胞斑块对低频响应，而 flanking 它的区域包含对更高频率范围响应的毛细胞。从基底乳头到一级核的投射可能反映了乳头的这些进化变化。蜥蜴的听觉神经投射已在许多蜥蜴中描述，包括壁虎、鳄蜥、鬣蜥、草原巨蜥和泰加蜥。在这些蜥蜴中，描述了一个额外的蜗核分区——内侧NA，Szpir等人提供了可能的解释。

在鳄蜥中，Szpir标记并生理表征了单个听觉神经轴突。这些轴突根据最佳频率具有不同的投射模式。较低最佳频率的纤维投射至NM和外侧NA。高最佳频率的纤维仅投射至内侧NA。Szpir等人得出结论，蜗核的不同分区与不同的频率范围相关，并假设不同频率范围的刺激在脑中分别处理。在壁虎听觉神经的小染料注射后观察到类似模式。因此，蜥蜴提供了唯一的例子，其中一些听觉神经纤维不分叉终止于两个一级核NA和NM。相反，在两种检查的蜥蜴物种中，高最佳频率纤维仅投射至内侧NA，形成了比其他双孔类 proportionally larger 的独特高最佳频率通路。

壁虎NM双向投射至同侧和对侧NL，如其他双孔类所示。然而，关于NL是否存在于 archosaurs 和 lepidosaurs 共同祖先中仍存在不确定性，因为并非在所有蜥蜴中都识别出NL。蜥蜴NL可能难以找到；与 archosaur NL相比，它很小，可能是因为高度定向的蜥蜴外周减少了对声源位置中央计算的需求。

4.2 四足动物中的外侧丘系核

鸟类和壁虎的丘系核都很发达，具有相似数量的核。迄今研究的鸟类（仓鸮、斑胸草雀和鸽子）有四个外侧丘系核：背侧（LLD，分为前部和后部）、中间（LLI）和腹侧（LLV）。在壁虎中，我们先前使用钙结合和突触蛋白抗体仅识别出三个丘系核——一个LLD前部和后部，以及一个我们与鸟类LLV同源的核团——腹侧上橄榄核（SOv）。我们基于相似的解剖连接和脑干中的位置提出鸟类LLV和壁虎SOv是同源的。在 present study 中，使用神经束路追踪揭示了壁虎的第四个丘系核——内侧LLD。

鸟类和壁虎的丘系核具有相似的连接。在壁虎中，LLDa和LLDp主要接收来自NL、NA和SOd的上行投射，而LLDm主要接收来自SOd的上行投射。在斑胸草雀中，Krützfeldt等人显示LLD和LLV主要接收来自蜗核的上行输入，而LLI是SO传入纤维的接收者。因此，大壁虎中的LLDm和鸟类LLI共享相似的上行投射。在仓鸮、斑胸草雀和壁虎中，LLD further characterized by 通过 Probst 连合与对侧LLD的 reciprocal 连接，以及向鸟类听觉中脑的上行投射，类似于在大壁虎中观察到的连接。LLD还包含大量谷氨酸脱羧酶（GAD）阳性细胞体和大的、通常是 perisomatic 的GAD阳性末梢。这很有趣，因为相互连接的LLD在仓鸮中介导了耳间水平差异的EI处理。在一些鸟类中，LLD的后部和前部接收来自蜗核的不同投射。鸟类LLDp接收来自NA的投射，而LLDa在仓鸮和斑胸草雀中接收来自NL的输入，尽管这些细分在雏鸡和鸽子中无法识别。我们无法确定在大壁虎中NA和NL的投射是否存在类似区别。因此，尽管鸟类和壁虎的丘系复合体有许多相似之处，但单细胞水平的投射仍未解决。

青蛙和哺乳动物中也存在丘系核。在青蛙中，丘系核接收来自背髓核上行轴突的侧支和SO纤维，并与之相互连接。它们也投射至隆凸，并包含对听觉刺激响应的神经元。与所有其他迄今研究的四足动物不同，两栖动物的外侧丘系是单个核，缺乏明显的细分，尽管先前的作者推测该核内的细胞簇可能类似于哺乳动物的外侧丘系核。哺乳动物通常被认为拥有四个丘系核——腹侧（两部分）、中间和背侧核（VNLL、INLL和DNLL）——它们在细胞结构、连接和免疫细胞化学特性上有所不同。DNLL和VNLL在各个物种中得到认可。INLL有时被认为是VNLL的背侧部分，而VNLL通常进一步分为两个或多个部分。许多VNLL和DNLL细胞使用甘氨酸或GABA作为神经递质，表明它们提供向IC的抑制性投射。最后，哺乳动物DNLL核通过 Probst 连合相互抑制，类似于壁虎LLD和鸟类LLDp。因此，四足动物的外侧丘系核共享许多特征。与没有丘系核的硬骨鱼相比，我们观察到鸟类