巴基斯坦首次发现Asproinocybe属新种A. pakistanica及国家新记录种A. daleyae

《Nordic Journal of Botany》：Asproinocybe pakistanica sp. nov. and A. daleyae.: first representatives of the genus Asproinocybe from Pakistan

本文报道了巴基斯坦湿润温带森林中发现的Asproinocybe属新种A. pakistanica（形态学特征为浅至巧克力褐色菌盖、紫色菌褶、具白色条纹的浅褐色菌柄）和国家新记录种A. daleyae，通过形态学与分子数据（ITS序列分析）证实其分类地位，系统发育分析显示新种与A. sinensis亲缘最近，填补了该稀有属在巴基斯坦的分布空白。

　　

摘要

本研究基于形态学和分子数据，描述了来自巴基斯坦湿润温带森林的新种^{Asproinocybe pakistanica} sp. nov. 和国家新记录^{Asproinocybe daleyae}。新种形态特征为菌盖呈浅至巧克力褐色变异色调、紫色菌褶、浅褐色菌柄（近菌褶处浅紫色）并具显著白色条纹；显微特征为椭球形、具疣状突起的担孢子。核糖体DNA ITS区系统发育分析支持其归属于^{Asproinocybe属（目前仅报道少数物种的稀有属）。表型与系统发育比较证实该物种为一新分类群，且与A. sinensis亲缘最近。}

引言

^{Asproinocybe R. Heim（1969b）以A. lactifera Heim为模式种，是Asproinocybaceae科中的小型稀有属。其典型特征为tricholomatoid型子实体、贴生至亚离生的粉至紫色菌褶。该属与Tricholosporum属（具十字形担孢子）的区分特征为不规则瘤状或疣状担孢子。Asproinocybe分布广泛但物种局域化，目前全球已知11种，尚未在巴基斯坦报道。历史上该属曾归入Thricholomataceae科，后基于多基因系统发育分析（ITS、nrSSU、nrLSU、RPB1、RPB2、TEF1-α）被独立为Asproinocybaceae科。本研究在巴基斯坦阿尤比亚国家公园松林发现疑似新种，并在戈坎德山谷发现A. daleyae，首次报道该稀有属在巴基斯坦的存在。}

材料与方法

采样地点：子实体采集自2017–2020年雨季，地点为开伯尔-普赫图赫瓦省的阿尤比亚国家公园（ Abbottabad县）和戈坎德山谷（Buner县）。新鲜标本经拍照、记录颜色（Kornerup和Wanscher标准）、干燥后于-80°C处理3–4周后保存。

形态学表征：通过水、5% KOH或Melzer试剂复溶干燥标本，观察担子、担孢子、囊状体、菌丝等显微结构，使用Olympus BH2显微镜拍照，并通过Adobe Photoshop Elements 6绘图。担孢子测量遵循Jumbam等（2019）方法。

分子与系统发育分析：从干标本菌褶提取基因组DNA（Wizard? Genomic DNA Purification kit），ITS区域用引物ITS1/ITS4扩增（PCR条件：94°C 3 min；35×（94°C 1 min, 50°C 45 s, 72°C 1 min 30 s）；72°C 10 min）。测序后序列经Sequencher和BioEdit校对，存入GenBank（登录号MW969760-MW969761、MW979508、PQ278642）。通过BLAST比对下载相关序列，MAFFT在线工具比对后手动校正。采用最大似然法（RAxML-HPC2，GTRCAT模型，1000次 bootstrap）构建系统发育树，外群为^{Bonomyces属物种。}

结果

ITS序列BLAST显示，新种（KH257、KH257a、ANP212）与^{Tricholosporum和Asproinocybe物种相似度最高：与A. sinensis（OK377048-049）相似度95%，与A. daleyae（MN275025）和A. lyophylloides（MN275015-018）相似度84%。巴基斯坦A. daleyae序列与新西兰模式株相似度99%。系统发育分析（38条序列，770个位点）显示，巴基斯坦Asproinocybe标本与A. sinensis、A. fucata、A. daleyae、A. lyophylloides形成高支持率（100%）分支；巴基斯坦A. daleyae与新西兰株聚为一支。}

分类学

^{Asproinocybe pakistanica} Muh. Ali, Niazi & Khalid sp. nov.（图1–3）

模式标本：巴基斯坦开伯尔-普赫图赫瓦省Abbottabad县阿尤比亚国家公园（33°51′54.83″N, 73°8′19.57″E, 2400 m），2017年7月26日，Muhammad Ali和A.R. Niazi采集，KH257（主模式：LAH36942；ITS登录号MW969760）。

词源：种加词“pakistanica”指模式产地巴基斯坦。

形态描述：菌盖宽3.2–6.0 cm，凸至平凸，肉质，边缘稍内卷；表面黏滑、吸湿，光滑，巧克力褐色（4F8）至深皮革褐色（5F7–5F8）。菌褶宽0.4–0.7 cm，贴生，缺刻，稍腹鼓，密，肉质，紫色（17E8）；小菌褶2–3列。菌柄4.2–6.5 × 1.1–1.5 cm，中生，近圆柱形，浅褐色具显著白色条纹，近菌褶处浅紫色，触压后变褐，基部被绒毛。菌肉疏松，部分中空。

显微特征：担孢子（5.50–）6.63（–7.75） × （3.60–）4.70（–5.83） μm，Q =（1.1–）1.3（–1.9），透明，薄壁，非淀粉质，近球形至瘤状或疣状。担子39.6–47.2 × 10.0–11.4 μm，棒状，透明，有时缢缩，2–4孢，具锁状联合；担子小梗1.76–4.77 μm。侧生囊状体21.88–25.30 × 7.10–8.83 μm，瓶状，基部窄，顶端尖，具小滴。菌盖皮层为交织的圆柱形菌丝（2.46–7.77 μm），具锁状联合。菌柄皮层类似（3.30–8.15 μm）。

生境：单生于巴基斯坦松林湿润温带森林土壤。

其他标本：KH257a（LAH36942；ITS: MW979508）；ANP212（LAH36274；ITS: MW969761）。

^{Asproinocybe daleyae} J.A. Cooper（图4–5）

描述：子实体小型。菌盖直径22–27 mm，凸形，光滑，边缘灰红色（7.5 YR 6/2）至中央红黑色（7.5 YR 2/1）。菌褶贴生至稍延生，密，脆，紫灰色（5 YR 6/1）。菌柄长30–35 mm，中生，实心，等粗，顶端与菌盖边缘同色，基部渐变为淡黄色（5Y 8/3），顶端被粉状物，擦伤后变暗。

显微特征：担孢子（5.3–）5.8（–6.4） × （3.3–）3.8（–4.9） μm，具不规则瘤状角突，透明。担子22–31 × 5.3–6.9 μm，圆柱至窄棒状，4孢。侧生囊状体23–29 × 10–12 μm，椭球至坛形。菌褶边缘具褐色壳状物。菌盖皮层为交织透明菌丝（3.5–5.5 μm）。锁状联合未见。

标本：巴基斯坦开伯尔-普赫图赫瓦省Buner县戈坎德山谷（3183 m），2020年8月13日，IK-268（ITS: PQ278642）。

讨论

^{Asproinocybe是分布广泛但罕见的属，亚洲此前仅记录4种。本研究通过形态与分子数据确认巴基斯坦新种A. pakistanica与国家新记录A. daleyae。系统发育显示新种与A. sinensis（中国）、A. fucata（印度）、A. daleyae（新西兰）、A. lyophylloides（澳大利亚）亲缘近。}

形态比较：^{A. pakistanica与最近缘种A. sinensis均具肉质子实体、凸形菌盖和中生菌柄，但后者菌盖非黏滑、色暗褐至橙褐，菌柄较短（43 mm），显微结构各部位尺寸均更大。A. fucata菌盖更小（0.5–4.5 cm）、干燥非吸湿，孢子更小；A. daleyae菌盖干燥、灰紫色，孢子尺寸相近但菌柄更短；A. lyophylloides菌盖带紫色调，孢子稍小。与未获序列的物种比较：A. ianthinocystis菌盖极小（8 mm），孢子更小；A. nodulospora孢子更大；A. lactifera具乳管和大型孢子；A. brunneolilacina和A. russuloides孢子尺寸相近但菌盖颜色和形态差异显著。}

巴基斯坦^{A. daleyae与新西兰模式株在菌盖大小（22–27 mm对更大）、菌柄长度（30–35 mm）和孢子尺寸上存在差异，菌盖颜色由灰红色至红黑色（新西兰为灰紫色至褐色），生境为Quercus floribunda林（新西兰为Metrosideros excelsa林），但分子系统发育支持为同种。本研究扩展了A. daleyae的分布范围至亚洲。}

致谢：感谢HEC通过IRSIP项目资助、Marco Contu博士的审稿意见、Hira Bashir博士的采样与绘图协助，以及匿名审稿人的宝贵意见。

基金与利益冲突：无特定基金支持；作者声明无利益冲突。

作者贡献：Muhammad Ali和Abdul Rehman Niazi主导概念设计、数据收集与论文撰写；Urooj Ashraf、Alishba Anam参与方法与分析；Najam-ul-Sehar Afshan和Abdul Nasir Khalid负责资源与监督；Mary Catherine Aime提供资源与修订支持。