组织学前分析审查提升子宫内膜癌POLE突变检测效能

《The Journal of Molecular Diagnostics》：Preanalytical histology review improves POLE mutation detection in endometrial carcinomas

本文推荐一项质量改进研究，证实系统性组织学前分析审查（包括病理医师切片复核、肿瘤细胞性（Tumor Cellularity）记录及低肿瘤含量样本富集）可显著提升子宫内膜癌POLE（DNA聚合酶ε）突变检测的分析性能，表现为突变信号强度增强（中位峰比从0.32升至0.58，p=0.004）、复检率降低（8.8%→2.3%，p<0.0001），为低肿瘤含量标本的体细胞突变检测提供实践依据。

　　

POLE Mutation Detection

所有病例均采用实验室自主研发的SNaPshot检测法对POLE核酸外切酶结构域进行突变筛查。简言之，通过五组PCR反应分别扩增POLE基因第9、11、13和14外显子（参考序列NM_006231.4）的热点突变区域，并针对第286、297、299、367、368、411、424、436、444、456、458、459及465号密码子进行16次单碱基延伸反应。该检测经验证的分析灵敏度可达5%突变等位基因频率（MAF），且要求肿瘤细胞比例不低于10%。

Tumor Assessment Protocol

实验室接收石蜡组织块或未染色切片进行POLE检测。若提供HE染色切片则直接复核；若仅提交组织块则制作HE染色切片并数字化扫描。约75%病例采用数字化阅片。所有外院直接送检的分子检测标本均接受组织学复核。对于诊断性病理报告已由本机构完成的病例，实验室可直接调阅存档切片。病理医师通过评估肿瘤细胞占比（精确至10%区间）记录肿瘤细胞性。若肿瘤细胞比例低于40%，则进行肿瘤富集操作（如宏观刮取或手动显微切割）。所有操作均记录于标准化模板中。

Operational Impact

研究共纳入1,752例子宫内膜癌病例，其中干预前组924例，干预后组828例。标准化组织学审查的操作性影响如图2所示。

分子诊断实验室开展组织学复核的比例从1.7%（16/924）显著提升至74.5%（617/828），表明该方案被广泛采纳（p < 0.0001）。肿瘤细胞性记录率从29%跃升至100%（p < 0.0001），肿瘤富集操作率从1.4%增至31.5%（p < 0.0001）。突变信号强度（以突变型/野生型峰值比衡量）中位数由0.32升高至0.58（p = 0.004），而复检率从8.8%降至2.3%（p < 0.0001）。两组在患者年龄、标本类型或突变检出率（干预前6.3% vs 干预后5.0%, p = 0.25）方面无显著差异。最常见的突变为POLE p.Pro286Arg（47%）和p.Val411Leu（21%）。

Discussion

组织学复核与肿瘤富集是实体瘤分子检测实验室的常规实践。低肿瘤含量是导致检测失败的常见原因，但关于系统性前分析组织学审查对临床实践影响的文献较为有限。唯一类似研究显示，在基于RNA表达的弥漫性大B细胞淋巴瘤分子分型中，组织学复核与宏观切割可改变60%病例的分型结果。本研究通过质量改进项目证明，前分析组织学审查能显著优化靶向POLE检测的分析性能，同时提升肿瘤细胞性记录的规范性、增加肿瘤富集操作并降低复检需求。这些发现支持对低肿瘤含量病理标本开展前分析评估，以提升体细胞突变检测可靠性。