印度人群循环microRNAs作为子宫内膜异位症新型生物标志物的全面分析与验证研究

《Reproduction and Fertility》：Circulating microRNAs and endometriosis: a comprehensive analysis and validation of identified biomarkers in an Indian population

本研究针对子宫内膜异位症(Endometriosis)诊断依赖侵入性手术的临床困境，系统筛选并验证了循环microRNAs(miRNAs)作为非侵入性生物标志物的潜力。通过文献荟萃分析和qRT-PCR实验，发现miR-451a和miR-20a-5p在印度患者血浆中显著下调，ROC曲线显示优异诊断性能(AUC=0.8939/0.8106)，为开发微创诊断工具提供新方向。

　　

子宫内膜异位症（Endometriosis）是一种困扰全球约10%育龄妇女的常见妇科疾病，在印度人群中患病率甚至高达25-35%。该疾病以子宫内膜样组织异位生长为特征，引发慢性盆腔疼痛、痛经和不孕等严重症状。目前临床诊断的金标准依赖腹腔镜检查，这种侵入性手术不仅费用高昂，还伴随手术风险，且患者从症状出现到确诊往往延迟5-10年。尽管影像学检查和血清CA-125检测有所应用，但敏感性和特异性不足，亟需开发可靠的非侵入性诊断方法。

近年来，循环microRNAs（miRNAs）因其在血浆、血清等体液中的高稳定性、疾病特异性表达模式以及非侵入性检测优势，成为多种疾病生物标志物研究的热点。这些长约19-24核苷酸的非编码RNA可通过外泌体或蛋白复合物包裹抵抗RNA酶降解，在子宫内膜异位症研究中展现出潜力。然而，既往研究存在明显局限性：不同人群研究结果不一致，印度人群数据缺失；多数miRNAs缺乏跨研究验证；技术标准化不足导致结果可重复性差。为此，研究团队开展了针对印度人群的系统性验证研究。

本研究首先通过PubMed和ArrayExpress等数据库进行系统性文献检索（截止2022年12月），筛选出22项符合标准的研究。研究人员创新性地采用复合评分系统，对102个上调和197个下调的miRNAs进行重现性评估，最终选定9个最具潜力的候选miRNAs（miR-451a, let-7b, miR-150-5p, miR-17-5p, miR-3613-5p, miR-20a-5p, miR-342-3p, miR-125b-5p, miR-21-5p）进行实验验证。

研究团队从印度新德里全印度医学科学研究所招募了12例经腹腔镜确诊的晚期子宫内膜异位症患者和11例健康对照。所有参与者均处于月经周期分泌中期（第18-24天），通过严格排除标准控制了激素治疗、恶性肿瘤和其他妇科疾病的干扰。血浆样本采集后使用QIAzol Lysis Reagent进行总RNA提取，通过miRCURY LNA miRNA SYBR Green PCR Kit进行逆转录和qRT-PCR分析，以cel-miR-39为提取效率对照，miR-16-5p为内参基因。

数据搜索与分析

通过系统性文献分析和复合评分体系，发现仅有28个（10%）差异表达miRNAs在至少两项研究中得到重复验证。在实验室间验证类别中，仅9个（18%）miRNAs被多个实验室重复验证，凸显了研究间的高度异质性。

研究对象

两组人群在年龄（P=0.1663）、雌激素（E2）和孕激素水平上无显著差异，但子宫内膜异位症组血清CA-125水平显著升高（51.9±9.5 vs 16.0±8.0 U/mL, P<0.0001），证实了该标志物在区分患者与无症状个体中的价值。

差异表达分析

qRT-PCR结果显示，子宫内膜异位症患者血浆中miR-451a和miR-20a-5p表达显著低于对照组（P=0.0007和P=0.0106），经Benjamini-Hochberg多重检验校正后仍保持统计学意义（P_adj=0.0063和0.0477）。其余7个miRNAs未显示显著差异。

ROC曲线分析

受体操作特征曲线分析显示miR-451a和miR-20a-5p具有优异诊断性能：miR-451a的AUC为0.8939（95%CI:0.7508-1.000），灵敏度83.33%，特异性90.91%；miR-20a-5p的AUC为0.8106（95%CI:0.6164-1.000），灵敏度91.67%，特异性72.73%。二元逻辑回归模型进一步证实这两个miRNAs能有效区分患者与对照组（χ²(2)=20.54, P<0.001），模型总体准确率达87.0%。

研究结论表明，miR-451a和miR-20a-5p在印度子宫内膜异位症患者循环血中显著下调，展现出作为非侵入性诊断标志物的巨大潜力。miR-451a作为已知的肿瘤抑制因子，通过调控IL-6R/JAK2/STAT3、MIF/PI3K/AKT等信号通路参与炎症和肿瘤进程，其在子宫内膜异位症中的低表达可能与疾病微环境调控相关。miR-20a-5p作为miR-17-92簇成员，通过调控NF-κB信号通路影响炎症反应和免疫调节，其下调可能参与疾病发生发展。

讨论部分指出，本研究存在样本量有限、仅包含晚期患者、未记录BMI和生活方式因素等局限性。未来需要通过多中心大样本研究验证这些标志物的临床适用性，并解决技术标准化、参考基因选择、样本异质性等挑战。值得注意的是，miR-20a-5p在不同组织类型研究中存在表达方向不一致的现象，提示循环miRNAs与组织miRNAs可能具有不同的调控机制。

该研究首次在印度人群中对循环miRNAs进行系统验证，为开发适用于该人群的非侵入性诊断工具奠定了基础。研究成果发表在《Reproduction and Fertility》期刊，为改善子宫内膜异位症的早期诊断和患者管理提供了重要科学依据。随着对细胞外miRNAs释放和摄取机制的深入理解，以及检测技术的不断进步，循环miRNAs有望成为子宫内膜异位症诊断和管理的重要工具。