中空纤维流场流分离技术实现高质量细胞外囊泡分离及其在真性红细胞增多症液体活检中的应用

《Talanta》：Hollow Fiber Flow Field-Flow Fractionation Enables High-Quality Extracellular Vesicle Isolation from Minimal Plasma Samples in Polycythemia Vera Liquid Biopsy

本文系统评价了中空纤维流场流分离（HF5）技术在细胞外囊泡（EVs）分离中的应用，特别是在真性红细胞增多症（PV）液体活检中展现出的优势。研究表明，HF5技术仅需60μL血浆即可实现EVs的高效分离，较传统尺寸排阻色谱（SEC）方法样品用量减少8.3倍，且能更好地保持EVs的完整性和功能性，为肿瘤微环境（TME）研究和生物标志物发现提供了重要技术支持。

　　

^Highlight

^研究队列

本研究纳入初诊PV患者（n=10）和年龄匹配的健康供者（HDs，n=6）。所有患者均根据2022年WHO分类标准诊断，且携带JAK2^V617F突变。

^{血液样本采集与血浆制备}

从PV患者和年龄/性别匹配的HDs采集的外周血置于含EDTA的真空采血管和血清管中。

^{研究对象的一般临床特征}

初诊PV患者（n=10）和HDs（n=6）的一般实验室数据见表S1。全血细胞分析显示，与HDs相比，PV患者的白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容和血小板计数均显著升高。

^{HF5血浆分馏及颗粒选择性分离方法}

如上所述，将PV患者（n=10）和HDs（n=6）的血浆样本注入HF5平台。血浆在280nm处的分离谱图（图1A）显示在4分钟和8分钟处有两个主峰。

^讨论

EVs的分离与表征在分析和生物技术领域仍面临挑战。开发一种只需微量样本的分离技术，可利用EVs的尺寸和流体动力学特性分离纳米级生物颗粒，这对通常稀缺且极其珍贵的患者样本研究尤为重要。另一方面，有效分离不同EVs亚群对于深入研究其特定功能至关重要。

^结论

本研究证明，HF5方法作为一线分离技术，能成功从微量癌症患者（如PV患者）血浆中获取完整、表征一致且数量可观的EVs。与现有方法相比，HF5在EVs纯度、降低聚集度和提高重复性方面表现卓越。分离得到的EVs在表面蛋白表达、生物学和功能特性方面与SEC法获得的EVs相当，且在细胞摄取等方面展现优势。