tRNAGlu-CTC-1-1来源小RNA通过靶向CDK1抑制未成熟猪支持细胞增殖的机制研究

《Theriogenology》：tRNAGlu-CTC-1-1-derived small RNAs inhibit the proliferation of immature porcine Sertoli cells

本研究首次揭示猪睾丸支持细胞中tRNA来源小RNA（tsRNA）的表达特征与功能，发现tRNAGlu-CTC-1-1来源的tsRNA通过靶向细胞周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）抑制未成熟支持细胞增殖，为男性生殖细胞微环境调控提供了新的表观遗传视角。

　　

Highlight

Sertoli cells collection

如前所述，分别使用7日龄和150日龄长白猪的睾丸分离未成熟和成熟支持细胞。简要流程包括：剥离被膜并剪碎的睾丸组织用IV型胶原酶（0.2% w/v）在37°C消化30分钟以获取曲细精管，进一步用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化获得单细胞悬液。随后采用差异贴壁法获得支持细胞。

Profiling of tsRNA in porcine Sertoli cells

为揭示猪支持细胞中tsRNA的表达谱，我们首先分析了既往研究中的小RNA测序数据。与猪睾丸生殖细胞相比，成熟支持细胞中tsRNA占比达4.37%，高于精原细胞和精母细胞，低于精子，与圆形精子细胞相当（图1A）。tsRNA的长度峰值分布于31-35 nt（图1B），且主要来源于tRNA的5'端切割（图1C）。进一步鉴定出13个在成熟支持细胞中高度富集的tsRNA家族（图1D）。其中，tRNA^Glu-CTC-1-1来源的tsRNA在支持细胞成熟过程中表达量显著上升（图1E）。

Discussion

tsRNA是由经典非编码RNA（tRNA）切割产生的小分子RNA。源自相同tRNA的tsRNA在长度和切割位点上存在差异。研究表明小鼠睾丸组织tsRNA长度范围为26-32 nt，而猪生殖细胞tsRNA呈现双峰分布（18-25 nt和26-35 nt）。我们发现猪支持细胞tsRNA长度集中于30-35 nt，且主要来自tRNA的5'端，与既往报道一致。值得注意的是，tRNA^Glu-CTC-1-1来源的tsRNA通过靶向CDK1抑制未成熟支持细胞增殖，这为支持细胞功能调控提供了新机制。

Conclusion

我们证实了Glu-CTC-1-1通过靶向CDK1的3'非翻译区（3' UTR）调控未成熟支持细胞增殖，该过程可能涉及与mRNA结合蛋白的相互作用。因此，支持细胞中的tRNA来源小RNA分子在细胞成熟过程中发挥重要作用，未来需进一步探究tsRNA在猪繁殖中的功能。