纳米抗体-Fc融合蛋白作为血清学检测校准品的创新策略：为COVID-19及其他疾病诊断提供标准化解决方案

《Journal of Analysis and Testing》：Nanobody-Fc Fusion Proteins as Calibrators for Serological Assays

为克服生物标准品可用性不稳定和批次差异等局限，研究人员开发了基于纳米抗体-Fc（Nb-Fc）融合蛋白的重组校准品。该研究通过骆驼源噬菌体库筛选出具有广谱反应性的抗SARS-CoV-2 RBD纳米抗体，与人IgG1-Fc融合后在HEK293细胞中高效表达。结果表明该Nb-Fc校准品具备二聚体构象、热稳定性和强ELISA反应性，并成功拓展至抗核衣壳蛋白Nb-Fc及IgE型校准剂制备，为传染性和非传染性血清学诊断提供了可扩展的标准化新方案。

　　

在血清学检测标准化进程中，稳定且可重复的校准品开发至关重要——尤其当传统生物标准品面临供应波动和批次差异等挑战时。本研究提出了一种创新方案：利用纳米抗体与Fc片段（Nb-Fc）的融合蛋白构建重组校准品，作为血清学中生物样本的替代品。研究人员通过免疫骆驼的噬菌体展示库，筛选出对SARS-CoV-2变异株具有广谱反应性的抗受体结合域（RBD）纳米抗体，将其与人免疫球蛋白G1（IgG1）的Fc区域融合后，在HEK293细胞中实现高效表达。通过引入巨细胞病毒内含子A（CMV Intron A）序列，显著提升了蛋白产量。

对所得Nb-Fc蛋白的表征证实：其不仅形成稳定的二聚体结构，还展现出优异的热稳定性，并在酶联免疫吸附试验（ELISA）中表现出强烈的RBD结合能力，奠定了其作为COVID-19血清学检测可靠标准的地位。该平台的通用性进一步通过两种应用得以验证：针对SARS-CoV-2其他诊断靶点（如核衣壳蛋白）的Nb-Fc校准品，以及用于过敏诊断的纳米抗体-IgE型校准剂，凸显了该策略对不同抗体同种型的适配能力。Nb-Fc系统中纳米抗体的可替换性，为快速应对新兴病毒变异或新诊断靶标提供了灵活路径。

此项研究确立了Nb-Fc嵌合体作为生物标准品的替代方案，具备可重复生产、规模化制备和长期稳定的优势，在感染性与非感染性血清学诊断领域展现出广阔的应用前景。