ERG11VF125AL与MRR1N647T突变在耳念珠菌III分支氟康唑耐药性中的相对贡献度研究

《Clinical Microbiology and Infection》：Relative contributions of the ERG11VF125AL and MRR1AN647T mutations to fluconazole resistance in Clade III Candidozyma ( Candida) auris clinical isolates

本研究通过CRISPR-Cas9基因编辑技术，系统解析了耳念珠菌III分支中ERG11VF125AL和MRR1N647T突变对三唑类药物（如氟康唑）耐药性的相对贡献。结果表明ERG11突变是主要耐药决定因子，而MRR1突变作用有限，为临床精准用药提供了重要依据。

　　

亮点

目标

耳念珠菌（Candida auris）是一种新兴的全球性关注真菌病原体，通常表现出多重耐药性。在已描述的六个C. auris分支中，III分支几乎普遍对氟康唑耐药，且几乎所有III分支分离株都携带导致ERG11（编码氟康唑靶点羊毛甾醇14α-脱甲基酶基因）发生VF125AL替换的突变，以及导致Mrr1a（Mdr1转运蛋白转录调节因子编码基因）发生N647T替换的突变。本研究旨在确定这些突变对III分支C. auris分离株三唑类抗真菌药物敏感性的具体贡献。

方法

我们使用CRISPR-Cas9基因编辑技术将III分支的MRR1A突变引入I分支背景中。在两个III分支临床分离株中，我们将天然的MRR1A和ERG11突变纠正回其野生型序列，并敲除了MDR1。测量了所有菌株的三唑类药物敏感性和MDR1基因表达。

结果

在I分支背景中引入N647T替换使氟康唑最低抑菌浓度（MIC）从2微克/毫升增加到4微克/毫升。在每个III分支背景中纠正MRR1A或敲除MDR1导致氟康唑MIC降低一个稀释度（从64微克/毫升降至32微克/毫升），而纠正ERG11则导致氟康唑MIC降低三到四个稀释度（从64微克/毫升降至4-8微克/毫升）。同时纠正两个突变导致MIC进一步降至4微克/毫升。对伏立康唑也观察到类似的变化。

结论

我们的研究结果表明，虽然MRR1A突变贡献较小，但ERG11突变是导致III分支分离株中观察到的绝大部分氟康唑耐药性的原因。我们还表明，虽然这些突变同样影响伏立康唑的敏感性，但它们对伊曲康唑、艾沙康唑或泊沙康唑的敏感性没有影响，这提示了这些抗真菌药物治疗由III分支C. auris分离株引起感染的潜在效用。