化疗后维持治疗新策略：西拉美辛、β-拉帕醌和帕博西利对小细胞肺癌的抗肿瘤作用评估

《European Journal of Pharmacology》：Evaluation of siramesine, β-Lapachone, and palbociclib as novel maintenance therapies after chemotherapy in small cell lung cancer

本研究针对小细胞肺癌(SCLC)化疗后易复发和产生耐药性的临床难题，探索了西拉美辛(SR)、β-拉帕醌(LP)和帕博西利(PB)作为新型维持疗法的潜力。研究人员通过体外实验、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型和小鼠体内实验，证实这三种药物单药或作为化疗后维持治疗均能显著抑制H69细胞增殖、降低克隆形成能力并减小肿瘤体积。其中PB通过诱导活性氧(ROS)产生和细胞衰老发挥作用。该研究为克服SCLC治疗瓶颈提供了有前景的新策略，相关成果发表于《European Journal of Pharmacology》。

　　

在肺癌的凶险谱系中，小细胞肺癌(SCLC)以其迅猛的增殖速度和早期转移倾向而臭名昭著。尽管初始化疗有效，但高达80-85%的患者确诊时已处于晚期，且绝大多数会在短期内产生耐药性，导致五年生存率极低，不足1%。这种“初始有效，迅速复发”的治疗困境，迫使科学家们将目光投向化疗后的“维持治疗”策略，旨在延缓或阻止疾病进展。传统的新药研发耗时耗力，而“老药新用”——即重新挖掘已获批或已有研究基础的化合物的新适应症——成为一条充满希望的捷径。

在此背景下，由María ángeles Chico、Kevin Doello等研究人员组成团队，在《European Journal of Pharmacology》上发表了一项创新性研究，系统评估了西拉美辛(SR)、β-拉帕醌(LP)和帕博西利(PB)这三种作用机制各异的药物，单用或作为卡铂(CB)化疗后的维持治疗，对抗小细胞肺癌的效果与机制。西拉美辛是一种SigmaR2配体，能干扰溶酶体功能；β-拉帕醌是一种天然来源的萘醌类化合物；而帕博西利则是已用于乳腺癌的CDK4/6抑制剂。研究人员假设，这些药物可能通过不同于传统化疗的机制，有效清除化疗后残存的肿瘤细胞，从而延长疗效。

为了验证这一设想，研究人员运用了多层次的研究方法。他们首先在体外评估了多种药物（包括DM, DSF, PB, SIL, SR, LP, SS）对SCLC细胞系H69、非小细胞肺癌细胞系A549和正常肺上皮细胞系L132的细胞毒性，筛选出最具潜力的候选药物SR、LP和PB。随后，通过软琼脂克隆形成实验评估药物对肿瘤细胞自我更新能力的抑制。在机制层面，利用蛋白质印迹法(Western Blot)分析了与细胞死亡（PARP1, Bcl-2）、自噬（LC3β, p62）和衰老（p21）相关的蛋白表达，并检测了活性氧(ROS)水平。研究还采用了鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)这一替代模型进行体内血管生成和肿瘤生长抑制实验，并通过免疫荧光、TUNEL染色等技术分析肿瘤组织的细胞增殖(Ki-67)、神经内分泌分化（神经元特异性烯醇化酶）、免疫细胞浸润(CD45)、细胞凋亡和自噬情况。最终，在免疫缺陷小鼠皮下移植H69细胞构建的SCLC模型中，严谨评估了SR、LP和PB单药治疗以及卡铂化疗后序贯这三种药物作为维持治疗的抗肿瘤效果和系统性毒性。

3.1. 抗增殖活性

研究人员首先测试了多种药物对肺癌细胞系的杀伤作用。结果显示，SR、LP和PB对SCLC H69细胞表现出显著的抗增殖活性，其半数抑制浓度(IC₅₀)值分别为7.11 μM、3.87 μM和34.98 μM。相比之下，其他一些候选药物如DM、SIL、SS和DSF对H69细胞效果不佳。基于此，SR、LP和PB被选为后续深入研究的重点。

3.2. 对SCLC克隆形成能力的影响

为了评估药物是否能抑制肿瘤细胞的长期增殖和自我更新能力，研究人员进行了克隆形成实验。在软琼脂中，经SR、LP和PB预处理后的H69细胞，其形成的克隆数量和体积均显著减少。特别是CB和LP处理使克隆体积减少了99%，SR处理也使其减少了79.5%。这表明这些药物能有效削弱肿瘤细胞的成瘤潜力。

3.3. 对肿瘤侵袭性和细胞死亡介导因子的调控

通过蛋白质印迹分析，研究人员探索了药物的作用机制。结果发现，PB处理显著增加了自噬标志蛋白LC3βII的表达和衰老相关蛋白p21的表达，同时引起了p62的积累，提示其可能阻断了自噬流并诱导了细胞衰老。SR处理也显著提高了p21的水平。而LP则未引起PARP1（凋亡标志）或LC3βII/p62（自噬标志）的明显变化。此外，使用抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的实验表明，CB、LP和PB的部分细胞毒性作用依赖于ROS的产生。

3.4. 鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)体内肿瘤诱导实验

在CAM模型上成功构建了H69细胞来源的肿瘤。虽然药物治疗在统计上未显著缩小肿瘤面积，但观察到SR和LP处理组肿瘤面积减小的趋势。组织学分析显示，经药物处理的肿瘤组织致密性降低，细胞碎片增多。免疫荧光分析进一步证实，所有药物治疗均显著降低了肿瘤细胞的增殖指数（Ki-67阳性率）和神经内分泌标志物（烯醇化酶）的表达，并减少了肿瘤内CD45阳性免疫细胞的浸润。在细胞死亡方式上，TUNEL染色显示LP诱导了最高水平的凋亡，而LC3β免疫荧光则提示PB处理增强了自噬相关信号。

3.5. 体内单药与维持治疗的抗肿瘤效果

在小鼠模型中，SR、LP和PB单药治疗均能显著抑制皮下H69肿瘤的生长，肿瘤体积分别减少了77.8%、75%和83.1%，效果与卡铂(CB，减少84.5%)相当。更重要的是，当在卡铂化疗后序贯使用这些药物作为维持治疗时，展现了更强大的抗肿瘤效果：CB+SR、CB+LP和CB+PB方案分别将肿瘤体积进一步减少了96.5%、99.1%和99.5%，显著优于单用卡铂。肿瘤重量分析也支持了这一结论。然而，值得注意的是，在维持治疗组，特别是CB+LP和CB+PB组，观察到了小鼠生存率的下降以及血液学参数的改变，提示在化疗基础上加用维持药物可能增加了毒性，这为未来的临床转化提供了需要关注的方面。

研究的讨论部分对上述发现进行了深入阐释。SR作为一种溶酶体靶向药物，在本研究中并未像在其他癌种中报道的那样引发明显的ROS升高或经典凋亡/自噬，但其诱导p21高表达提示了细胞周期阻滞或衰老的可能新机制。LP展现出强效的细胞毒性，但其在SCLC中的确切死亡机制仍有待明确。PB则通过诱导ROS、引发衰老和干扰自噬等多种途径协同发挥抗肿瘤作用，这与在其他癌症中的研究相符。该研究首次在体内模型中系统评估了SR、LP和PB作为SCLC维持治疗的潜力，结果令人鼓舞。尽管在联合治疗时观察到一定的毒性，但其显著增强的疗效提示这些药物，尤其是PB，具有与现有标准治疗方案（如化疗联合免疫治疗）进行组合探索的巨大价值。

综上所述，这项研究有力地证明了药物重定位策略在攻克小细胞肺癌治疗难题中的应用价值。西拉美辛、β-拉帕醌和帕博西利通过独特的机制，不仅能作为单药有效对抗小细胞肺癌，更能作为化疗后的维持治疗，显著增强并延长抗肿瘤反应。尽管安全性需要进一步优化，但这项研究为改善小细胞肺癌患者预后提供了三种极具潜力的候选药物和新的治疗思路，为后续的临床前和临床研究奠定了坚实的基础。