COVID-19患者EBV共感染与外周血单核细胞ACE2基因表达变化的关联性研究

《Biochemistry and Biophysics Reports》：Investigation of Epstein-Barr virus coinfection and changes in the gene expression of angiotensin converting enzyme II in peripheral blood mononuclear cells in COVID-19 patients

本研究针对SARS-CoV-2感染背景下EBV共感染是否加重病情及调控ACE2表达的关键科学问题，通过ELISA和实时PCR技术检测92例COVID-19患者血浆与PBMCs中EBV感染状态，并分析ACE2 mRNA表达水平。结果显示EBV再激活罕见（2.18%），且PBMCs中ACE2表达无显著变化，提示EBV共感染并非COVID-19严重程度的主要驱动因素，为临床鉴别诊断提供了重要依据。

　　

当新型冠状病毒（SARS-CoV-2）在2019年底悄然出现并迅速演变为全球大流行时，医学界面临着一个前所未有的挑战：这种呼吸道病毒不仅本身能引起从普通感冒样症状到严重肺炎甚至死亡的一系列临床表现，更棘手的是它可能与其他病原体形成"合谋"关系，共同加重患者病情。其中，爱泼斯坦-巴尔病毒（Epstein-Barr virus, EBV）这种广泛存在于全球90%以上成人体内的疱疹病毒引起了研究人员的特别关注。EBV具有潜伏感染和再激活的特性，当人体免疫系统因SARS-CoV-2感染而受损时，EBV可能"趁虚而入"，重新活跃起来，导致咽炎、疲劳和淋巴细胞减少等症状。更值得警惕的是，有研究表明EBV可能上调血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2, ACE2）的表达——这正是SARS-CoV-2进入细胞的关键受体。这种潜在的相互作用是否会在COVID-19患者中真实发生，进而影响疾病进程，成为了一个亟待解答的科学问题。

来自伊朗克尔曼医科大学的研究团队在《Biochemistry and Biophysics Reports》上发表了一项针对性研究，他们设计了一个精巧的实验方案：一方面通过血清学（检测VCA IgM抗体）和分子生物学（检测EBV DNA）方法双管齐下，评估COVID-19患者中EBV的感染状态；另一方面同步检测患者外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）中ACE2的基因表达水平，并与健康对照组进行比较。这种将病毒共感染状态与关键受体表达变化相结合的研究思路，为理解COVID-19的发病机制提供了新的视角。

研究人员从2022年2月至6月期间（奥密克戎变异株流行期）在克尔曼Afzalipour医院收治的92例COVID-19患者中采集血液样本，同时招募30名年龄性别匹配的健康志愿者作为对照。他们采用Ficoll密度梯度离心法分离PBMCs和血浆，分别用于EBV检测和ACE2表达分析。关键技术包括：酶联免疫吸附测定（ELISA）检测EBV VCA IgM抗体；实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测EBV DNA和ACE2 mRNA表达；以HPRT作为内参基因进行相对定量分析。

研究结果呈现出一系列有趣的发现：

在患者基本情况方面，研究纳入了92例COVID-19患者（平均年龄64.32±18.8岁），其中54.3%为普通病房患者，45.7%需要重症监护（ICU）治疗，总体病死率为37%。这些数据反映了研究期间收治患者的疾病严重程度分布。

EBV感染状态检测结果显示，所有患者血浆样本的EBV VCA IgM抗体检测均为阴性，表明没有近期EBV感染。同时，PBMCs中EBV DNA的检出率极低，仅有2例（2.18%）呈阳性，且均为非ICU患者。这一结果表明，在研究的COVID-19患者群体中，EBV再激活现象并不常见。

ACE2表达分析揭示了更有意义的发现：COVID-19患者PBMCs中ACE2 mRNA表达水平（平均折叠变化1.19±0.16）与健康对照组（1.00±0.01）相比无显著差异。即使将患者细分为ICU组、非ICU组、死亡组和存活组进行比较，ACE2表达水平也均未显示出统计学意义的差异。特别值得注意的是，2例EBV DNA阳性患者的ACE2表达水平（1.58±0.08）与EBV阴性患者（1.22±1.26）相比也无显著升高。

这些结果共同指向一个结论：在COVID-19住院患者中，EBV再激活是相对罕见的现象，且与外周血单核细胞中ACE2的表达变化没有明显关联。这一发现挑战了先前关于EBV可能通过上调ACE2表达而加重COVID-19病情的假设，至少在外周血免疫细胞层面是如此。

研究的讨论部分深入分析了这些阴性结果的可能原因和意义。首先，ACE2的表达具有明显的组织特异性，其主要在呼吸道和肠道上皮细胞高表达，而在PBMCs中的表达水平本身较低，这可能解释了为什么在PBMCs中未能观察到显著变化。其次，EBV再激活可能是短暂性的，单一时间点的采样可能无法捕捉到瞬时的再激活事件。此外，样本全部在患者入院时采集，无法反映疾病进程中可能发生的动态变化。

尽管如此，这项研究的价值不容忽视。它通过严谨的实验设计证实了在特定人群和特定时间点下，EBV共感染并非COVID-19严重程度的主要影响因素。这为临床医生提供了重要参考：在常规COVID-19治疗中，可能无需过度关注EBV筛查，除非患者出现特异性临床表现。同时，研究也提示未来需要开展更多针对呼吸道上皮组织等病毒主要靶细胞的研究，以及进行多时间点的纵向观察，才能更全面地理解病毒间的相互作用。

该研究的局限性包括样本来源单一（同一家医院）、样本量有限、横断面设计缺乏纵向随访数据，以及EBV阳性病例数过少难以进行有意义的亚组分析。此外，缺乏直接对呼吸道组织样本的分析也限制了对ACE2组织特异性表达规律的深入探索。

总结而言，这项研究为我们理解COVID-19与EBV共感染的相互关系提供了重要证据。虽然结果未能支持EBV再激活在COVID-19发病机制中的重要作用，但为后续研究指明了方向：需要更大规模、多中心、多组织、纵向的研究设计来彻底阐明潜伏病毒感染与SARS-CoV-2之间的复杂相互作用。在新冠病毒不断变异、与人类长期共存的背景下，这类研究对于制定精准的防治策略具有长远意义。