基于CRISPR-Cas/LFA联用RT-LAMP技术的唾液特异性快速检测新方法

《Forensic Science, Medicine and Pathology》：Saliva identification by RT-LAMP integrated with CRISPR-Cas and LFA

本研究针对犯罪现场唾液鉴定难题，开发了整合逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）、CRISPR-Cas基因编辑系统与侧向流动层析试纸（LFA）的检测新方法。通过特异性识别唾液生物标志物FDCSP基因，实现在多种体液样本中精准鉴别唾液（检测限达2?6-2?7），为法医学体液鉴定提供无需复杂设备的快速解决方案。

　　

唾液是犯罪现场常见体液，但目前缺乏快速确认唾液身份的有效手段。本研究创新性地将改良型环介导等温扩增（Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP）技术与CRISPR-Cas（成簇规律间隔短回文重复序列及其关联蛋白）系统、侧向流动检测（Lateral Flow Assay, LFA）技术整合，建立起靶向唾液特异性基因——滤泡树突细胞分泌蛋白（follicular dendric cell secreted protein, FDCSP）的检测体系。特异性验证显示，唾液RNA检测呈阳性，而外周血、精液、阴道分泌物和月经血等常见体液RNA均为阴性；重复性实验表明连续三天检测同一唾液样本的三重复本均获稳定阳性结果。该技术检测灵敏度达2^?6（0.3906 ng RNA）至2^?7（0.1953 ng RNA），无需复杂设备且操作简便，为体液鉴定提供了新的技术路径。