粪肠球菌DNA在急性失代偿期肝硬化中的作用：系统性炎症与肾功能障碍的关键驱动因素

《Frontiers in Medicine》：Enterococcus faecium DNA in acute decompensated cirrhosis: a key player in inflammation and kidney dysfunction

本文深入探讨了粪肠球菌（EF）DNA在急性失代偿期肝硬化患者血清中的检出率及其临床意义。研究发现，EF DNA阳性（26%）与系统性炎症（SI）标志物（如白细胞计数、CRP、IL-6）升高、肝功能指标（胆红素、AST）恶化及肾功能损害（肌酐升高）显著相关，尤其在急性慢加急性肝衰竭（ACLF）患者中更为突出。该研究揭示了EF DNA可作为肠道屏障功能障碍和疾病严重程度的潜在生物标志物，强调了肠-肝轴在ACLF发病机制中的核心作用。

　　

引言

肝硬化是大多数慢性肝病的共同终末期，其并发症每年导致全球超过200万人死亡。从代偿期肝硬化向失代偿期的转变是疾病进展的一个标志，然而，从常规诊断中评估个体患者失代偿风险的预测指标仍然缺乏。急性失代偿肝硬化的一种可怕病程是急性慢加急性肝衰竭（ACLF），这是一种病情迅速恶化的致命性疾病，目前尚无有效的治疗选择。系统性炎症（SI）在ACLF的发展中起着至关重要的作用，但预测疾病进展的指标仍然有限。粪肠球菌（EF）与细菌易位和SI有关，但其在ACLF中的临床意义尚不清楚。本研究旨在探讨EF DNA在急性失代偿肝硬化患者血清中的预后意义，特别关注其与系统性炎症和器官功能障碍（包括ACLF的发展）的关联。

材料与方法

本研究共分析了197例前瞻性入组的急性失代偿肝硬化患者的血清样本，并与234名健康对照者进行比较。所有患者在入组研究前均签署书面知情同意书，本研究经当地伦理委员会批准。在基线时和3个月的随访期间收集临床数据、实验室数据和血清样本。使用QIAmp? DNA Blood Mini Kit从250 μL血清中提取基因组DNA。通过实时定量PCR（RT-qPCR）检测EF DNA，使用针对EF 16S rDNA基因的特异性引物。为了量化EF，将EF 16S rDNA的序列片段克隆到pGEM-T载体中，并建立RT-qPCR标准曲线。同时，使用Luminex? Discovery Assay测量血清中11种炎症细胞因子的浓度。采用随机森林分析和相关性分析来评估临床变量与EF DNA存在之间的关联。统计分析使用GraphPad Prism进行，p值≤0.05被认为具有统计学意义。

结果

患者特征

在197例患者中，男性135例（69%），女性62例（31%），平均年龄59岁。健康对照组234人，平均年龄41岁。根据PREDICT研究标准对患者进行分类，83例（42%）为稳定失代偿期肝硬化（SDC），49例（25%）为不稳定失代偿期肝硬化（UDC），65例（33%）在入院后3个月内发展为ACLF。

EF DNA的检测

RT-qPCR分析显示，51例（26%）急性失代偿肝硬化患者的血清EF DNA呈阳性（EF+），而健康对照组中仅有3例（1.3%）为阳性（p=0.001）。在EF+患者中，23例（45%）为SDC，9例（18%）为UDC，19例（37%）为ACLF。在ACLF患者中，EF+患者的CT值显著低于SDC和UDC患者，表明其血清中EF 16S rDNA的丰度更高。与传统微生物学诊断方法（血培养、尿液样本、VRE拭子）相比，RT-qPCR检测EF DNA的灵敏度显著更高（χ²=64.68，p<0.0001）。

EF DNA阳性与炎症反应增强相关

对炎症相关标志物的分析显示，EF+患者的白细胞计数、C反应蛋白（CRP）和白细胞介素-6（IL-6）水平存在显著差异。ACLF EF+患者的白细胞计数最高，显著高于UDC和SDC患者。CRP和IL-6水平也呈现出类似趋势，ACLF EF+患者的这些指标显著升高，表明EF DNA阳性与更强烈的系统性炎症反应相关，尤其是在疾病晚期阶段。

EF DNA阳性与肝功能恶化相关

肝功能标志物分析显示，血浆胆红素和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平随着疾病严重程度而增加。ACLF EF+患者的胆红素水平最高，显著高于其他亚组。AST水平在UDC EF+患者中最高。尽管在同一表型内EF+和EF-患者之间没有显著差异，但EF DNA的存在可能在UDC和ACLF等更晚期的表型中加剧肝功能恶化。

EF DNA阳性与肾功能障碍相关

血浆肌酐水平分析揭示了EF DNA检测与肾功能之间的相关性。ACLF EF+患者的肌酐浓度最高，表明该组患者的肾功能障碍更为严重。肌酐水平在ACLF EF-患者中也显著高于SDC组。在SDC和UDC组中，肌酐水平相对较低，EF+和EF-患者之间无显著差异。这些发现表明，EF DNA的存在与ACLF患者肾功能恶化相关。

EF DNA阳性与临床参数的关联

随机森林和相关分析表明，巨噬细胞抑制因子（MIF）是ACLF最显著的临床预测因子。血小板计数和钠水平也被确定为EF DNA存在的重要预测因子。在住院时间方面，疾病严重程度是主要决定因素，ACLF患者的累计住院日和住院时间最长，EF+患者有延长趋势但未达统计学显著性。

讨论

本研究发现EF DNA在失代偿期肝硬化患者血清中的检出率显著高于健康人群，并且与系统性炎症和器官功能障碍密切相关。EF DNA阳性，特别是在ACLF患者中，与白细胞计数、CRP、IL-6等炎症标志物升高，以及胆红素、AST等肝功能指标和肌酐等肾功能指标的恶化显著相关。这表明EF或其DNA易位到体循环可能反映了肠道通透性增加，这被认为是ACLF中SI和随后器官衰竭的关键驱动因素。

EF DNA通过作为微生物相关分子模式（MAMP），可能被Toll样受体9（TLR9）等模式识别受体识别，触发先天免疫反应和促炎细胞因子（如IL-6、TNF-α）的释放，从而加剧SI和器官损伤。本研究首次揭示了EF DNA阳性与ACLF患者肾功能损害之间的强关联，提示EF在ACLF相关肾损伤的发生或恶化中可能扮演重要角色。

与传统微生物学方法相比，RT-qPCR检测EF DNA具有更高的灵敏度，凸显了血清分子诊断在识别亚临床微生物易位及其炎症后果方面的潜在效用。IL-6、白细胞计数、CRP、胆红素和血清肌酐等标志物可作为监测疾病进展和EF DNA阳性相关炎症负荷的潜在生物标志物。

总之，本研究结果表明，血清中EF DNA的存在可能通过促进SI和器官功能障碍，特别是影响肾功能，参与ACLF的病理生理级联反应。因此，EF DNA可作为肠道屏障功能障碍的指标，并进一步强调了肠-肝轴在ACLF发生和发展中的关键作用。未来的研究应侧重于探索针对EF易位或由此引发的炎症通路的具体治疗策略，以改善ACLF患者的预后。