源自原发性硬化性胆管炎患者胆汁的细菌培养物诱导炎症和细胞死亡

《mSphere》：Cultured bacteria isolated from primary sclerosing cholangitis patient bile induce inflammation and cell death

本研究首次从原发性硬化性胆管炎（PSC）患者胆汁中成功分离培养活菌，并证实其分泌的因子可诱导胆管上皮细胞死亡、肠道屏障损伤及炎症反应（TNF-α/IL-8），揭示了特定菌种（如Enterococcus faecalis、Klebsiella pneumoniae）在PSC病理中的差异化作用，为靶向微生物疗法提供了新视角。

　　

ABSTRACT

原发性硬化性胆管炎（PSC）是一种以胆道系统炎症和进行性纤维化为特征的慢性肝病。其发病机制尚不明确，且缺乏有效疗法。既往研究观察到肠道与胆道微生物组改变与PSC的关联。本研究旨在明确从PSC患者胆汁中培养的细菌分离株是否能诱导细胞出现疾病相关表型，包括细胞死亡、上皮通透性改变、炎症反应以及宿主保护性通路的变化。通过内镜逆行胆管造影收集PSC患者胆汁，并以接受胆囊切除术的非PSC患者作为对照。在厌氧条件下培养胆汁细菌，并通过16S测序对每个样本的50个菌落进行鉴定。非PSC对照组未分离出细菌，而大多数PSC患者胆汁中培养出细菌。与肠道或口腔相比，PSC胆汁微生物组多样性降低，以一至两种菌种为主。使用人结肠（Caco-2）、肝（HepG2）和胆管（EGI-1）细胞系，表征了七种PSC相关细菌分离株上清液对细胞表型的影响。总体而言，PSC相关细菌产生的因子对肝细胞和胆管细胞具有细胞毒性。一株粪肠球菌（Enterococcus faecalis）分离株（以及较小程度的一株小韦荣球菌（Veillonella parvula）分离株）可诱导上皮通透性增加，而大肠杆菌（Escherichia coli）、坏死梭杆菌（Fusobacterium necrophorum）和肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）分离株可诱导胆管细胞炎症因子产生。本研究数据表明，从PSC胆汁中培养的细菌可诱导PSC发病机制特征的细胞变化，且不同分离株诱导不同的细胞反应。本工作为未来研究细菌对PSC的贡献提供了起点，最终目标是为该疾病开发疗法。

INTRODUCTION

PSC是一种罕见的慢性疾病，其特征是胆管炎症和进行性纤维化，可导致多灶性胆管狭窄、继发性胆汁性肝硬化和失代偿性肝病。PSC与炎症性肠病（IBD）密切相关；约70%–80%的PSC患者同时被诊断为IBD。PSC还与胆道和结肠癌风险升高相关。目前，除肝移植外，PSC尚无有效治疗方法，且移植后PSC仍可能复发。PSC的病理生理学知之甚少。对PSC疾病表型潜在机制的研究对于开发肝移植以外的疗法至关重要。

虽然PSC的起源未知，但目前认为环境因素和遗传因素共同促进了PSC的发病。在环境触发因素中，肠道微生物组被假设在PSC发展中起关键作用，该理论得到PSC和IBD中微生物群落组成改变的详细描述的支持。先前的研究已经分析了PSC患者与各种非PSC对照的肠道和胆道微生物组。对PSC肠道微生物组的研究总体上发现，与非PSC对照相比，PSC患者的微生物多样性较低。两项先前关于胆道微生物组的研究发现，与非PSC对照相比，接受内镜逆行胆管造影（ERCP）的PSC患者胆道微生物多样性较低。然而，胆道微生物组目前研究不足，健康肝脏中的胆汁是否无菌仍存在争议。PSC患者的肠道和胆道微生物组与对照组相比，某些细菌类别的丰度过高。尽管这些研究的方法多样，但韦荣球菌属（Veillonella）、链球菌属（Streptococcus）、肠球菌属（Enterococcus）和梭杆菌属（Fusobacterium）在PSC患者中 consistently 更为丰富。先前的研究还包括粪便或血浆代谢组学，并观察到PSC患者与对照组相比，微生物衍生代谢物的丰度发生变化。总之，这些微生物种群和代谢物产生的改变表明，微生物组可能在PSC的发展中发挥功能性作用。虽然一些研究使用小鼠模型探索靶向PSC来源的肺炎克雷伯菌的治疗潜力，但特定PSC相关细菌与细胞表型之间的直接关系仍未得到充分探索。

鉴于对细菌在PSC发病机制中可能起到的因果作用知之甚少，我们决定研究从PSC患者中分离细菌是否能为了解该疾病根本原因的研究提供一个起点。作为这条道路的第一步，本工作中，我们从PSC患者胆汁中分离细菌，以表征单个分离株在人类结肠、肝和胆管细胞中诱导疾病相关细胞反应的能力，包括细胞死亡、上皮屏障损伤和炎症。我们的微生物培养和细胞检测均在厌氧条件下进行，以模拟PSC中胆道树的限氧环境。从分析的七种PSC来源分离株中，我们确定虽然PSC相关细菌总体上似乎产生对肝细胞和胆管细胞具有细胞毒性的因子，但其他细胞表型更特定于某些分离株。只有一株粪肠球菌分离株，以及在较小程度上的一株小韦荣球菌分离株，能够诱导上皮通透性，而大肠杆菌、坏死梭杆菌和肺炎克雷伯菌分离株诱导胆管细胞炎症细胞因子基因的表达。这些结果表明，PSC患者胆汁中的细菌可引起炎症和细胞损伤，并表明不同的细菌物种可能有助于疾病发病机制的不同方面。我们的发现为进一步研究PSC相关细菌的机制提供了概念验证，以更好地理解这种疾病的原因。

RESULTS

PSC患者胆汁含有可厌氧培养的细菌

我们通过ERCP从10名PSC个体以及3名接受胆囊切除术的非PSC个体（作为对照受试者）收集胆汁。我们在厌氧条件下培养胆汁，因为纤维化肝病与慢性缺氧相关，可能选择厌氧菌。我们观察到大多数PSC患者胆汁样本含有可培养的细菌。相比之下，对照样本均未含有可培养的微生物。对重新划线分离株进行菌落挑选和16S rRNA测序进一步显示，大多数PSC患者的胆汁样本以1-2种细菌为主。来自同一患者相隔8个月的两个胆汁样本表明，同一1-2种物种可能随时间在同一个体的胆道微生物组中占主导地位。这些分离株还检测了产生H₂S的能力，这与IBD，特别是溃疡性结肠炎（UC）有关。在含有可培养细菌的PSC样本中，一半（8个中的4个）含有产生H₂S的分离株。宏基因组分析（由于从胆汁中提取gDNA困难，并非所有样本都能进行）通常验证了我们的PSC胆汁培养结果。大多数样本表现出与我们细菌培养中观察到的相同的1-2种细菌物种的过度表达。然而，对PSC 4和PSC 9的胆汁样本进行宏基因组分析确实揭示了几种未培养物种的存在。总之，这些结果表明，该队列中大多数PSC患者的胆汁中存在活菌。虽然大多数样本含有一或两种优势物种，但这些物种的身份因患者而异，突出了个体PSC胆道微生物组的异质性。

接下来，我们对患者样本中一个物种内有10个或更多分离株的物种进行了克隆性分析。我们观察到在大多数情况下，一个物种内的分离株属于单个克隆，尽管在选定的情况下，在一个患者体内鉴定出一个物种的两个克隆（即PSC 1–8个月，唾液链球菌（Streptococcus salivarius）；PSC 3，肺炎克雷伯菌；PSC 9，肺炎克雷伯菌）。这一分析的一个重要注意事项是，我们在比对进行克隆性分析之前对16S序列进行了修剪。因此，可能丢失了一些碱基对差异，我们不能明确说明鉴定的克隆组之间没有差异。尽管如此，我们的结果表明，总体而言，在给定患者中，物种内似乎存在相当高的同质性。

PSC细菌分离株产生影响人类细胞活力的因子

PSC以胆管上皮损伤和进行性纤维化为特征。因此，我们优先评估细胞活力，以确定PSC相关细菌是否产生能够直接损伤肝细胞和胆管细胞的因子，可能启动或延续组织损伤。由于大多数PSC患者也患有IBD，并且细菌从肠道易位到胆道已被提出作为PSC发病机制的潜在贡献者，我们还测试了细菌上清液是否影响结肠细胞活力。使用已建立的结肠（Caco-2）、胆管（EGI-1）和肝（HepG2）人癌细胞系在厌氧条件下进行细胞活力测定。肠道共生参考菌株脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis）和致病参考菌株鸡肠球菌（Enterococcus gallinarum）对这些特定人类细胞系的细胞死亡影响此前未知。肠道共生对照脆弱拟杆菌未在结肠细胞系中诱导细胞死亡。脆弱拟杆菌反而诱导Caco-2细胞生长，先前使用正常结肠上皮细胞（hcoEPIC）的研究确实观察到轻微生长的诱导。鸡肠球菌在所有三种细胞系中诱导细胞死亡，而脆弱拟杆菌在胆管和肝细胞系中诱导细胞死亡。脆弱拟杆菌是一种通常不与胆管和肝细胞相互作用的肠道共生菌，这可能有助于其对这两种细胞类型的细胞毒性作用。除一种PSC来源的细菌分离株外，所有无菌过滤的细菌上清液均在胆管和肝细胞中诱导细胞死亡，其中肝细胞受影响程度更大。值得注意的是，除粪肠球菌PSC06_col01和坏死梭杆菌PSC08_col02外，PSC细菌上清液在结肠细胞中诱导细胞生长而非细胞死亡。小韦荣球菌_PSC07_col05也在肝细胞中诱导生长，并在较小程度上在胆管细胞中诱导生长。这些结果表明，一些胆道细菌产生对胆管和肝细胞活力产生负面影响的毒性因子，但对结肠细胞无此影响，表明这些细菌因子发挥细胞特异性效应。

PSC患者来源的粪肠球菌和小韦荣球菌诱导肠道通透性

肠道通透性增加是PSC-IBD的一个标志，可能促进细菌易位至胆道，有助于疾病 initiation 或 progression。我们使用Caco-2 Transwell测定来模拟致病性肠道通透性的诱导。参考菌株脆弱拟杆菌未诱导通透性，而参考菌株鸡肠球菌引起屏障损伤，这与先前研究的预期一致。在所有检查的PSC相关细菌中，只有来自粪肠球菌PSC06_col01培养物的上清液在处理6小时和12小时后均诱导上皮通透性。小韦荣球菌PSC07_col05上清液仅在12小时诱导通透性。与结肠细胞活力数据结合，这些结果表明粪肠球菌_PSC06_col01可能有助于上皮细胞死亡和屏障损伤，而一系列PSC相关细菌可能在胆道树和肝脏中引起细胞损伤。

PSC细菌分离株在胆管细胞中诱导炎症细胞因子

胆道炎症是PSC的一个核心特征。为了评估PSC相关细菌是否能直接引发胆管上皮细胞的炎症信号，我们测量了细胞因子诱导。用PSC来源的细菌上清液处理6小时后进行qPCR，表明大肠杆菌PSC10_col01、坏死梭杆菌PSC08_col02和肺炎克雷伯菌PSC03_col01诱导胆管细胞中促炎细胞因子TNFα和IL-8的转录，但在肝细胞中未产生相同效应。小韦荣球菌PSC07_col05在两种细胞类型中均诱导炎症反应。我们的结果表明，一部分PSC相关细菌在胆管细胞中诱导炎症反应，并确定TNFα和IL-8是这些分离株诱导的主要细胞因子。

PSC来源的细菌可影响人类胆管和肝细胞中的保护性通路

由于粘蛋白产生和碳酸氢盐分泌等宿主保护机制的破坏与PSC发病机制有关，我们评估了PSC来源的细菌是否能改变胆管和肝细胞中的这些通路。我们还检查了对硫解毒的影响，因为硫化氢损伤与IBD有关。来自小韦荣球菌PSC07_col14培养物的上清液导致胆管细胞中硫化物醌氧化还原酶（SQOR）的mRNA表达降低，这表明清除有毒硫化物的通路受损。唾液链球菌PSC01_col01和粪肠球菌PSC06_col01上清液在肝细胞和胆管细胞中上调硫代谢靶点的表达，以及胆管细胞中保护性碳酸氢盐伞的主要成分AE2的表达。唾液链球菌PSC01_col01还在肝细胞中上调粘蛋白表达，而小韦荣球菌_PSC07_col05在胆管细胞中上调粘蛋白表达。硫代谢、粘蛋白表达和碳酸氢盐伞相关基因表达的增加可能表明，肝细胞和胆管细胞响应这些细菌产生的毒性因子暴露6小时而上调保护性通路。

DISCUSSION

PSC的发病机制仍然知之甚少，检查疾病的潜在机制驱动因素对于开发新疗法至关重要。先前的研究已经确定，与非PSC对照受试者相比，PSC患者的肠道和胆道微生物组发生改变。在此，作为理解细菌对PSC发病机制贡献的第一步，我们从PSC患者胆汁中培养了细菌分离株，并使人类胆管、肝和结肠细胞接触这些细菌产生的因子。通过这些测定，我们鉴定了诱导PSC相关细胞表型的细菌分离株，包括上皮通透性、胆道和肝脏炎症以及细胞死亡。有趣的是，我们观察到来自不同物种的分离株诱导不同的细胞反应。我们的结果表明，PSC患者中的整体微生物群落可能有助于疾病发展，而不是单一菌株作为发病机制的普遍驱动因素。

首先，我们观察到在该队列的大多数患者中，个体PSC患者胆汁中一或两种细菌物种占主导地位。这一发现与先前的研究一致，这些研究表明PSC肠道和胆道微生物组与非PSC对照相比含有过量物种。我们对需要胆囊切除术的非PSC对照的培养未产生任何细菌分离株。相比之下，两项先前的PSC胆道微生物组研究发现，非PSC胆汁比PSC胆汁具有更大的微生物多样性。然而，这些先前研究中的非PSC对照来自需要ERCP的非PSC患者，而不是胆囊切除术患者。将我们的结果与这项先前的工作进行比较，突显了在不同疾病状态下进一步表征胆道微生物组的必要性。我们的非PSC胆囊切除术胆汁结果与最近的一项研究更一致，该研究发现，根据病理学家判断无异常病理的胆囊胆汁不含有可培养的微生物。相比之下，粪肠球菌、大肠杆菌、坏死梭杆菌、肺炎克雷伯菌、咽峡炎链球菌（Streptococcus anginosus）和唾液链球菌是PSC胆汁中培养的物种。一个需要注意的混杂因素是，本研究中的所有PSC患者都接受了抗生素（80%在收集前3个月内，100%在收集当天）。虽然临床必要且因此不可避免，但抗生素使用可能富集了某些物种。此外，虽然BHI+是一种丰富的培养基，先前已被证明支持多种厌氧菌的生长，但我们仅使用一种类型的培养基进行细菌分离。这两个因素可能影响了我们的培养结果。

我们研究的一个限制是收集的患者样本数量相对较少。将这项工作置于背景中，这项研究并非旨在对PSC胆汁中存在的细菌进行全面研究。相反，我们的研究代表了一个起点，证明从PSC患者胆汁中培养的细菌可引起胆道和肝细胞的炎症和死亡，以及上皮屏障损伤。此外，尽管样本量有限，我们的结果与先前的PSC微生物组分析工作一致，这些工作观察到PSC患者中肠球菌属、梭杆菌属和链球菌属的过量存在。因此，我们的样本很可能至少代表了文献中一致鉴定的大量PSC患者微生物组，除了我们没有看到韦荣球菌属的过度表达，正如先前研究中观察到的那样。重要的是，我们的培养结果表明PSC患者胆汁中存在活菌，这一结论仅基于测序分析是不可能得出的。

为了鉴定胆汁样本中未培养的细菌，我们进行了宏基因组测序。然而，尽管多次尝试使用不同的技术，从胆汁中提取gDNA被证明是困难的，阻止了一些患者胆汁样本的宏基因组分析。总体而言，我们在宏基因组分析中观察到的每个样本的细菌身份和多样性与我们的培养数据相似。这些结果表明，与先前PSC微生物组研究相比，我们分离株中韦荣球菌属代表性较低不是我们培养方法的结果，而是确实反映了我们的患者群体。对于两个测序样本（PSC 4和PSC 9），我们鉴定了一些我们无法培养的细菌，包括来自鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）、食酸菌属（Acidovorax）和弯曲菌属（Campylobacter）的物种。未培养细菌的鉴定对于PSC 4尤其值得注意，其在我们的培养工作中似乎是无菌的，表明一些细菌不适合我们的培养方法。尽管在这些样本中成功培养，但通过宏基因组分析在PSC 7和PSC 1（8个月后）中无法鉴定出任何细菌。这些情况下测序失败的一个可能解释是gDNA提取导致主要收集真核DNA，而分离出的细菌DNA量可忽略不计。这在PSC 7和PSC 1（8个月后）中确实看到，通过Kraken2分析，然后使用KronaTools分析，分别仅看到0.4%和1%的细菌DNA相对丰度。我们的工作突显了从某些胆汁样本中提取细菌DNA的困难，并激励开发更强大的DNA分离方法，考虑到胆汁样本特性（包括粘度和组成）的异质性。

在细胞培养测定中，从PSC胆汁中分离的细菌上清液在胆管和肝细胞中诱导细胞死亡，其中肝细胞受影响更大。这些结果可能表明，尽管这些细菌产生细胞毒性因子，但胆道树中的细胞可以耐受这些细菌。这种对细胞死亡的抵抗可能潜在地允许细菌栖息在胆道树中，导致这些细胞毒性因子的积累，然后可能引起肝损伤。有趣的是，除粪肠球菌PSC06_col01和坏死梭杆菌PSC08_col02外，PSC细菌上清液在结肠癌细胞系中诱导细胞生长。这些结果可能表明这些细菌产生促进生长的因子。小韦荣球菌_PSC07_col05在PSC来源的细菌中是独特的，因为它不诱导细胞死亡，而是诱导肝细胞生长，并在较小程度上诱导胆管细胞生长。确实，小韦荣球菌丰度增加与肝内胆管癌相关。未来的工作需要鉴定PSC相关细菌产生的潜在促进生长因子。虽然人类癌细胞系由于易于细胞培养而被建立为有用的体外模型，但应注意的是，由于源自癌症且已经处于疾病状态，它们可能对促进生长因子更敏感。因此，这些细菌对PSC患者结肠、肝和胆管细胞健康的影响可能更微妙。值得注意的是，参考共生菌株脆弱拟杆菌（ATCC 25285）（非源自PSC患者）在结肠细胞中诱导生长，在肝细胞和胆管细胞中诱导细胞死亡，尽管它是一种通常被认为是保护性和非致病性的无肠毒素菌株。

我们的肠道通透性测定结果表明，粪肠球菌PSC06_col01是上皮屏障损伤的强诱导剂，而小韦荣球菌PSC07_col05是较弱的诱导剂，而其他PSC来源的细菌没有这种效应。这些数据表明，肠球菌可能是PSC患者致病性肠道通透性的驱动因素，可能允许肠道细菌通过门静脉从肠道易位到肝脏并栖息在胆道树中。这些结果似乎与先前的研究一致，这些研究确定了与非PSC对照相比，PSC胆管胆汁中粪肠球菌丰度增加。它们也与先前的工作一致，显示粪肠球菌可通过其明胶酶活性增加肠道通透性。虽然粪肠球菌存在于人类肠道微生物组中，包括PSC患者的微生物组，但我们没有本研究PSC患者的配对粪便样本来确认胆汁中有粪肠球菌的个体是否在其胃肠道中也有这种微生物。未来配对肠道和胆汁宏基因组测序的研究将有助于揭示诱导肠道通透性的细菌与胆道树中活菌之间的联系。值得注意的是，我们的结果没有揭示PSC患者胆汁中的细菌是短暂的还是长期定植于胆道。未来研究PSC相关细菌分离株是否耐胆汁将有助于阐明细菌定植胆道的潜在能力。此外，未来的研究可能受益于检查粪肠球菌_PSC06_col01或其他粪肠球菌菌株是否在小鼠模型或胆管上皮通透性体外模型中诱导胆道通透性。

我们鉴定出PSC相关细菌大肠杆菌PSC10_col01、坏死梭杆菌PSC08_col02、肺炎克雷伯菌PSC09_col49、肺炎克雷伯菌PSC03_col01和小韦荣球菌PSC07_col05是胆管细胞中炎症细胞因子表达的诱导剂。这些细菌在肝细胞中没有相同效应，除了小韦荣球菌PSC07_col05。这些结果与PSC疾病进展一致，其中胆道树中的炎症先于肝损伤。有趣的是，诱导肠道通透性的主要分离株粪肠球菌PSC06_col01根据我们的转录分析未诱导胆道炎症。这些发现表明，不同的PSC相关细菌可能负责独特的细胞反应方面。此外，虽然大肠杆菌PSC10_col01、坏死梭杆菌PSC08_col02和肺炎克雷伯菌PSC09_col49都是H₂S生产者，但我们未观察到产生H₂S的肺炎克雷伯菌PSC09_col49比不产生H₂S的肺炎克雷伯菌PSC03_col01诱导更强的炎症。因此，尽管细菌H₂S产生可能与炎症相关，正如我们的结果所示以及其他研究所暗示的，但H₂S产生似乎不是细胞因子诱导的主要驱动因素。值得注意的是，参考菌株鸡肠球菌在测试的胆管和肝人癌细胞系中未诱导炎症细胞因子表达，但已显示在具有狼疮样自身免疫遗传倾向的小鼠肝细胞中诱导炎症细胞因子。这一结果突显了为疾病建模选择细胞类型的重要性。

我们的结果确定TNFα和IL-8是PSC相关细菌诱导的主要细胞因子。然而，测量的其他细胞因子（IL-6、IL-17A和IFNγ）先前已被确定为在PSC患者中升高。我们细胞测定的一个限制是仅包括上皮细胞，不包括免疫细胞。很可能免疫细胞的存在会导致PSC相关细菌诱导更多炎症细胞因子。尽管如此，我们的上皮细胞测定表明TNFα和IL-8可能在局部水平上促进胆道炎症。这些细胞因子先前已被显示在PSC患者血清中升高，IL-8在胆汁中也显著升高，与我们的结果一致。

我们观察到唾液链球菌PSC01_col01、粪肠球菌PSC06_col01和小韦荣球菌PSC07_col05上调选定基因的表达，这些基因参与硫代谢、粘蛋白表达和碳酸氢盐伞，可能是响应这些细菌产生的毒性因子。值得注意的是，影响这些保护性通路的细菌与显示诱导炎症细胞因子的细菌不同，除了小韦荣球菌PSC07_col05。这一发现再次支持从PSC患者胆汁中培养的细菌影响细胞表型不同方面的观点，除了小韦荣球菌PSC07_col05，它似乎对所有观察到的细胞反应都有轻微影响。在体外一致产生H₂S的两个细菌分离株（大肠杆菌PSC10_col01和坏死梭杆菌PSC08_col02）在这些靶向分析中未影响宿主细胞中硫代谢基因的表达。因此，我们的结果并不表明细菌H₂S产生驱动靶标硫代谢基因的表达。然而，潜在相关的是我们观察到来自小韦荣球菌PSC07_col14培养物的上清液导致胆管细胞中硫化物醌氧化还原酶（SQOR）的mRNA表达降低，这可能损害H₂S代谢。未来探索H₂S产生细菌对宿主细胞硫代谢的转录和蛋白质水平影响的工作对于揭示H₂S产生与宿主细胞损伤之间的潜在相互作用是必要的。

我们在厌氧条件下进行细胞测定，以保存可能 upon 氧气暴露降解或失活的不稳定细菌因子。此外，这些厌氧2D细胞测定和Transwell测定模拟了与厌氧细菌相互作用的顶端上皮界面的低氧环境，以及与纤维化疾病相关的缺氧环境。然而，我们认识到胆管、肝和肠上皮细胞是血管化的，并依赖有氧代谢。虽然我们在厌氧细胞培养实验中未观察到缺氧诱导的应激，但未来使用氧梯度下的3D细胞培养模型的研究对于完全解开微生物与缺氧驱动的效应，同时维持观察厌氧细菌生理相关效应所需的限氧环境将很重要。此类3D细胞测定已成功用于模拟肠道和气道上皮细胞与厌氧细菌的相互作用。

总之，通过培养患者来源的细菌分离株、收集无菌过滤的细菌上清液以及在厌氧条件下使用人类细胞测定，我们已经证明由单个PSC来源的细菌分离株产生的因子可以诱导肠道通透性、炎症和细胞死亡。我们工作的一个重要注意事项是，此处测试的分离株的影响不能假定代表该物种中的所有菌株。目前也不知道相同物种的肠道分离株是否具有与测试的胆道分离株相似或不同的影响，或者来自不同患者的胆道分离株是否会诱导不同的影响。这些问题应在未来的工作中进行调查。尽管如此，这些结果表明PSC患者微生物组中细菌的存在与疾病发展之间可能存在因果关系。我们的工作提出了一个PSC发病机制中微生物参与的潜在模型，其中由肠球菌或与共病IBD相关的因子引起的肠道通透性增加可能允许细菌从肠道易位到肝脏，这些微生物在那里可以与胆道树相关联，无论是短暂地还是通过定植。易位的细菌，如埃希氏菌、梭杆菌和克雷伯菌，然后可能驱动胆管中的炎症。这种炎症，加上长期暴露于PSC相关细菌产生的细胞毒性因子，然后可能导致或促成胆道纤维化和肝硬化的进展。此外，该模型突显