供肝保存液外泌体小RNA分子特征鉴别器官质量与移植后并发症的研究

本研究创新性地从肝移植供体保存液中提取外泌体小RNA，通过测序分析发现不同供体类型（循环死亡后捐献DCD、脑死亡后捐献DBD、活体捐献LD）及移植后并发症患者存在特异性microRNA（miRNA）表达谱。DCD供肝miRNA特征提示应激信号通路（如mTOR、TGF-β）激活，与移植后肝功能损伤（ALT/AST升高）相关。该无创检测方法为评估供肝质量、预测移植预后提供了新型生物标志物来源。

　　

引言

肝移植是终末期肝病的标准疗法，但供肝质量评估依赖有创活检，且无法全面反映器官状态。本研究探索通过分析供肝保存液中外泌体携带的小RNA（尤其是miRNA）来预测移植后结局的创新方法。外泌体作为细胞分泌的纳米级囊泡，其内容物可稳定反映组织应激状态，为无创评估器官质量提供了新思路。

患者与方法

研究纳入17例供肝保存液样本（含4例LD、9例DBD、4例DCD），通过超速离心和商业化试剂盒提取外泌体，经透射电镜、纳米颗粒追踪分析（NTA）及Western blot（CD9/flotillin蛋白标志物）验证外泌体特性。采用小RNA测序技术分析外泌体RNA组成，使用DESeq2进行差异表达分析（FDR<0.05），并通过miRNet、TargetScan等工具预测miRNA靶基因及通路富集。

结果

1. 1.
   外泌体特征：所有样本均成功分离出粒径46.9-124.2 nm的外泌体，平均浓度达1.17×10⁹-67.8×10¹⁰颗粒/mL。LD组因冷缺血时间（CIT）较短，外泌体产量较低（平均4.9×10⁹颗粒/mL）。
2. 2.
   供体类型特异性miRNA谱：主成分分析显示LD与DCD供肝miRNA谱差异最大（PC1=71%），DBD样本分布介于两者之间。DCD供肝特异性高表达hsa-miR-192-5p，且其miRNA富集于应激通路（mTOR、TNF-α、IL-1、TGF-β等），与移植后首日ALT/AST显著升高相符。
3. 3.
   并发症相关miRNA：
   • •
     门静脉血栓（PVT）病例中let-7家族miRNA（如let-7d-5p）显著上调，靶向基因涉及TGF-β/SMAD纤维化通路；
   • •
     缺血性胆管病变组中miR-382-5p等下调，其靶基因DDX3X与氧化应激保护相关；
   • •
     再灌注综合征组中miR-708-5p上调与细胞周期、Hedgehog信号通路关联。
4. 4.
   靶基因验证：交叉分析发现DCD/DBD差异miRNA靶向多个GWAS数据库记录的肝病相关基因（如CBL、MLIP、NAV2），靶标评分均>50，提示调控可靠性。

讨论

本研究首次系统证实供肝保存液外泌体miRNA可作为器官质量的无创生物标志物。DCD供肝的应激相关miRNA特征与临床肝功能指标（如ALT/AST）恶化趋势一致，提示其预测移植后并发症的潜力。尽管样本量限制需进一步验证，但该方法突破传统活检的局限性，为供肝精准评估及个体化术后干预提供了新策略。未来可通过功能实验（如miRNA抑制剂）深入验证关键miRNA的调控机制。

结论

供肝保存液外泌体小RNA分析是一种高效、无创的器官质量评估手段，其特异性miRNA特征有望成为预测移植结局的新型生物标志物，对优化供肝分配、提升患者生存质量具有重要意义。