靶向EGFR/ERK/MEK信号轴：负载百里醌的PEG化脂质体通过调控凋亡通路增强抗肝癌活性研究

《Hormones & Cancer》：Thymoquinone-conjugated liposomes improve cytotoxic and proapoptotic effects against hepatocellular cancer by altering the EGFR/ERK/MEK signaling axis

本研究针对肝细胞癌（HCC）治疗中化疗药物选择性差、耐药性高及天然活性成分百里醌（TQ）生物利用度低的问题，设计了一种聚乙二醇化百里醌脂质体（PEG-TQ-LP）递送系统。通过体外和体内实验，研究人员发现PEG-TQ-LP可显著抑制HepG2细胞增殖、迁移并促进其凋亡，其机制与下调BCL2、上调BAX表达、激活p38-MAPK以及抑制EGFR/MEK/ERK磷酸化有关。分子对接结果表明TQ能有效结合MEK-1、PLK1-PBD和p38-MAPK等关键靶点。该研究为HCC治疗提供了新型纳米递送策略，具有重要转化潜力。

　　

肝细胞癌（HCC）是全球范围内发病率和死亡率极高的恶性肿瘤，多数患者确诊时已处于晚期，失去了手术机会。当前标准治疗药物如索拉非尼存在严重毒副作用和耐药性问题，亟需开发高效低毒的新策略。天然活性成分百里醌（Thymoquinone, TQ）源自黑种草（Nigella Sativa），具有多重抗癌活性，但其水溶性差、稳定性低限制了临床应用。为此，研究人员构建了一种聚乙二醇化脂质体负载TQ（PEG-TQ-LP）的纳米递送系统，旨在提升TQ的靶向性和疗效，并深入探索其抗HCC的作用机制。

本研究采用薄膜水化法制备PEG-TQ-LP，并对其粒径、电位、包封率及释药特性进行表征。通过MTT法、克隆形成实验、划痕实验评估其体外抗增殖和抗迁移效果；流式细胞术、qRT-PCR和Western blot检测细胞凋亡及相关信号通路蛋白表达；利用DEN诱导的小鼠HCC模型评价体内抗肿瘤作用及抗氧化指标；采用分子对接模拟TQ与MEK-1、PLK1-PBD、p38-MAPK等靶点的结合模式。

3.1 纳米粒表征与药物释放

PEG-TQ-LP呈球形，粒径约28.62 nm，包封率达98.3%，在酸性环境中释放显著加快，具备肿瘤微环境响应释药特性。

3.2 抑制癌细胞增殖与迁移

PEG-TQ-LP可时间依赖性地降低HepG2细胞活力，抑制克隆形成和伤口愈合，效果优于游离TQ。

3.3 促进细胞凋亡

PEG-TQ-LP处理显著上调BAX、Caspase-3/8/9及细胞色素C基因表达，下调BCL2，流式细胞术证实早期和晚期凋亡细胞比例增加。

3.4 调控EGFR/ERK/MEK信号轴

Western blot结果显示PEG-TQ-LP抑制p-EGFR、p-MEK和p-ERK蛋白磷酸化，同时激活p-p38-MAPK，从而诱导线粒体凋亡通路。

3.5 分子对接验证结合亲和力

TQ与MEK-1、PLK1-PBD、p38-MAPK的结合能分别为-7.21、-6.69、-6.90 kcal/mol，主要通过氢键和疏水作用与关键氨基酸残基结合。

3.6 改善HCC模型肝损伤与氧化平衡

在DEN诱导的小鼠HCC模型中，PEG-TQ-LP显著降低血清ALT、AST、ALP及甲胎蛋白水平，提升总蛋白和白蛋白含量，恢复超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）等抗氧化指标，组织病理学显示肝结构改善。

3.7 促进体内凋亡相关基因表达

小鼠肝组织qRT-PCR显示PEG-TQ-LP处理后BAX、Caspase-3、Caspase-9表达上调，BCL2下调，与体外实验结果一致。

本研究通过纳米技术改造天然药物递送系统，显著提升TQ的抗肝癌效果。PEG-TQ-LP不仅有效抑制肿瘤增殖、迁移，还通过调控EGFR/ERK/MEK-p38MAPK信号轴促进线粒体凋亡，并在体内验证其肝保护作用和抗氧化功能。该策略为克服HCC治疗困境提供了新思路，兼具科学创新性与临床转化价值。未来需进一步开展药代动力学研究及多靶点信号网络深入探索，以推动其临床应用。