基于体内诱导抗原的鮰鱼诺卡氏菌DNA疫苗构建及免疫保护效应研究

《Journal of Fish Diseases》：Formulation and Immunological Assessment of DNA Vaccines Utilising In Vivo–Induced Antigens Against Nocardia seriolae in Hybrid Snakehead (Channa maculata ♀?×?Channa argus ♂)

本研究针对水产养殖中鮰鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae）感染防控难题，通过体内诱导抗原技术筛选EgtA与hp6747抗原蛋白，构建pcDNA-EgtA/hp6747 DNA疫苗。实验证实该疫苗可诱导杂交鳢产生特异性抗体（IgM），提升LYZ、ACP、AKP、SOD活性，显著上调TNFα、CD4、CD8α等免疫基因表达，对诺卡氏菌攻毒提供61.04%与43.73%的相对保护率，为鱼类诺卡菌病防控提供新策略。

　　

为防控水产养殖中由鮰鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae）引起的鱼类诺卡菌病，研究人员利用体内诱导抗原技术（IVIAT）筛选出两种候选抗原蛋白：谷氨酸-半胱氨酸连接酶EgtA（EgtA）和假设蛋白6747（hp6747）。通过将其与pcDNA3.1-myc-his-A质粒连接，构建了pcDNA-EgtA和pcDNA-hp6747两种DNA疫苗，并在杂交鳢（Channa maculata ♀×Channa argus ♂）中评估其免疫效果。

生物信息学分析显示，EgtA和hp6747蛋白均含有丰富的T细胞和B细胞表位。疫苗接种后，在脾脏、躯干肾、肌肉和肝脏中均检测到EgtA和hp6747基因的转录表达。值得注意的是，免疫鱼血清中特异性抗体（IgM）滴度显著升高，同时溶菌酶（LYZ）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性明显增强。实时定量PCR分析进一步证实，免疫相关基因（包括TNFα、CD4、CD8α、IL-1β、MHCIIα和MHCIα）在多个组织中的表达水平显著上调。

攻毒实验表明，pcDNA-EgtA和pcDNA-hp6747疫苗组对诺卡氏菌人工感染分别提供61.04%和43.73%的相对保护率（RPS）。综上所述，利用EgtA和hp6747这两种体内诱导抗原开发DNA疫苗，是控制养殖鱼类诺卡菌病的有效策略。