双抗体夹心ELISA检测鳗疱疹病毒的建立与验证：一种快速诊断工具的开发

《Journal of Fish Diseases》：Development and Validation of a Double-Antibody Sandwich ELISA (DAS-ELISA) for Detection of Anguillid Herpesvirus

本研究针对高致病性鳗疱疹病毒（AngHV）的快速检测需求，开发了特异性单克隆抗体并建立了高灵敏度的双抗体夹心ELISA（DAS-ELISA）检测方法。该方法与qPCR结果一致性达88.89%，可特异性识别多种组织中的病毒，为鳗鱼病毒防控提供了可靠技术支撑。

　　

鳗疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）是引发鳗鱼"黏液脱落与出血性败血症"的高致病性病原体，具有高发病率和累积死亡率。研究团队通过制备三种抗AngHV单克隆抗体（mAbs），经蛋白质印迹（Western blot）和间接免疫荧光验证其特异性与亲和力。在此基础上成功构建双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA），以mAb 10G8-9F4作为捕获抗体，靶向AngHV-ORF95₉₅的兔多克隆抗体9NA作为检测抗体。特异性实验显示该方法与锦鲤疱疹病毒（KHV）、草鱼呼肠孤病毒（GCRV）、传染性胰坏死病毒（IPNV）及大黄鱼虹彩病毒（LYCI）无交叉反应。该检测技术可精准识别感染鳗鱼心脏、肝脏、脾脏、肾脏、鳃、肠道、肌肉、皮肤黏液和鳍组织中的病毒，检测限为10,000个病毒拷贝数，与实时定量PCR（qPCR）相比临床样本符合率达88.89%。本研究建立的DAS-ELISA具备高反应性与特异性，为鳗鱼种群中AngHV的现场检测与防控提供了快速有效的诊断工具。