基于微滴式数字PCR的鸭源鸡毒支原体检测方法建立与流行病学评估

《Microbial Pathogenesis》：Development of droplet digital PCR (ddPCR) for the detection and quantification of Mycoplasma gallisepticum in duck flocks

本研究成功建立了一种检测鸭源鸡毒支原体（MG）的微滴式数字PCR（ddPCR）方法，该方法以mgc2基因为靶点，具有高灵敏度（最低检测限100 copies/μL）和特异性，比qPCR灵敏度提高10倍，临床样本检出率（53.3%）显著优于qPCR（46.7%），为水禽MG早期诊断和流行病学研究提供了重要技术支撑。

　　

亮点

最佳ddPCR反应条件

通过阳性微滴数量、聚集程度和阴阳性微滴分离度确定最佳反应条件。结果显示随着引物和探针浓度增加，阳性微滴数量呈下降趋势（图1A、2A）。当退火温度为58.5°C时，阳性微滴数量最多且阴阳性微滴分离最明显（图1B、2B）。最终确定最佳反应体系为：引物浓度200 nM，探针浓度100 nM，退火温度58.5°C。

讨论

鸡毒支原体（MG）是重要致病性支原体，给养禽业造成重大经济损失，被世界动物卫生组织列为须通报病原体。我们对山东和内蒙古大规模鸭场的初步流行病学调查显示MG流行率最高达22.75%。鸭群中MG的存在加剧了其在禽类产业链中的传播风险。

结论

本研究基于MG的mgc2基因序列成功建立了具有高特异性和灵敏度的ddPCR检测方法，最低检测限达10⁰ copies/μL，灵敏度比qPCR提高10倍，且重复性优异，适用于临床环境中MG的实验室检测。