基于指纹中游离色氨酸与NADH能量转移的生化时钟：用于死后间隔、年龄和性别评估的新方法

本文创新性地提出通过分析指纹汗脂物质中游离色氨酸与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）间的激发能转移（EET），建立了一种非侵入性的生化时钟模型。该研究利用分子光谱技术（包括F?rster共振能量转移机制），首次证实了游离色氨酸与NADH之间的能量迁移现象，为死后时间（PMI）估算、年龄判定和性别鉴别提供了新的技术路径。该方法突破了传统检测局限，在法医学和临床医学领域具有重要应用前景。

　　

^亮点

• 首次证实游离色氨酸与NADH之间存在激发能转移（EET）

• 开发基于指纹汗脂物质的非侵入式生化时钟模型

• 建立死后间隔（PMI）、年龄和性别的多重评估体系

^样品制备

研究所用材料详见表1。吸收和发射光谱分析样品均采用1%乙醇溶液制备（图1）。NADH溶液浓度设置为5×10^?4 M、10^?4 M和10^?5 M，固定添加物（100 μl）包括银纳米颗粒（AgNPs）、醋酸和对乙酰氨基酚。色氨酸（TRP）与NADH的"三明治检测"参照样品采用2%聚乙烯醇（PVA）水溶液制备。

^{紫外-可见吸收光谱}

紫外-可见光谱研究使用岛津双光束紫外-可见分光光度计UV-1900i在光谱模式下完成。光度重复性达0.0002吸光度（在0.5吸光度和1吸光度处）。测量前进行仪器校准，校准结果见表2。

^荧光光谱

荧光光谱研究使用Horiba Jobin Yvon公司的FluoroMax 4 TCSPC模型在发射模式下进行。

^{光谱表征——基础研究}

本研究从NADH在不同环境中的稳定性初步实验开始。这些研究将为后续通过该辅酶进行死亡时间判定、性别鉴定和年龄评估提供基础。需要全面表征光谱特性，包括稳态模式下的吸收和荧光光谱分析，以及时间分辨模式下的荧光光谱分析。

^{讨论与未来方向}

本研究证实了游离色氨酸向辅酶NADH的激发能转移（EET）现象，这一发现通过"三明治检测"中仅用色氨酸最佳激发波长即可观察到NADH荧光得到验证。该能量转移遵循明确路径，为检测生物标志物（即游离NADH）的强度变化提供了理想方案。能量转移通过分子振动实现，其中考虑了色氨酸和NADH电子态强耦合导致的能级贡献。

^{竞争利益声明}

作者声明以下财务利益/个人关系可能被视为潜在竞争利益：Aneta Lewkowicz在波兰共和国专利局有名为"基于游离色氨酸和游离NADH的非侵入式死亡时间、年龄和性别评估方法及实施设备"的专利正在申请中（申请号1739）。其他作者声明无已知竞争利益。

^致谢

本研究延续了波兰国家科学中心项目2021/41/B/HS5/03250（A.L.、M.Cz.、E.G.）资助的基础研究。图1、2、3、4、5、14、16、17使用BioRender制作。