基于合成哺乳动物RNA的辅助模块，用于高效基因表达

《ACS Synthetic Biology》：Synthetic Mammalian RNA-Based Auxiliary Module for High Gene Expression

基因表达泄漏性调控与RNA增强系统构建

　　

合成和天然的基因表达调控系统在基础研究以及生物医学和生物技术的众多应用中得到了广泛使用。然而，在适当的诱导因子出现之前，基因表达的“泄漏”现象（即 promoter 活动）可能会带来负面影响，从生物传感器系统的失效到医疗应用中的毒性副作用都有可能发生。在这里，我们构建了一个基于辅助 RNA 的增强系统，该系统利用相互抑制机制，可以添加到现有的基因表达系统中，而无需修改相关的转录因子、启动子或目标基因。该系统利用一种持续表达的小发夹 RNA 来降低目标基因的表达水平，这种基因的表达受一个响应性启动子的调控。此外，另一个与目标启动子相同的启动子驱动一种专门设计用于结合 shRNA 的蛋白质的表达，从而减轻其抑制作用。通过数学建模，我们验证了该系统在减少基因表达泄漏和增强多西环素诱导的 Tet-On 系统（在二维和三维球形培养环境中进行测试）、GAL4 诱导系统以及天然癌症特异性启动子–pH2A1 系统的表达效果方面的实际效果。