靶向EYA家族酪氨酸磷酸酶增强Menin与DOT1L抑制剂疗效：揭示KMT2A重排白血病治疗新策略

《Experimental Hematology & Oncology》：Inhibition of EYA family tyrosine phosphatase activity reveals a therapeutic vulnerability and enhances Menin and DOT1L inhibitor efficacy in KMT2A-rearranged leukemia

本刊推荐：为解决KMT2A重排白血病（MLL-r）靶向治疗耐药难题，Badmus团队开展EYA家族酪氨酸磷酸酶（PTP）靶向治疗研究。研究发现痛风药物benzbromarone（BBR）通过抑制EYA1/EYA3活性，显著增加RNA Pol II CTD Tyr1磷酸化水平，诱导细胞周期阻滞与衰老，并在动物模型中有效延缓白血病进展。尤为重要的是，BBR与menin-MLL抑制剂VTP50469协同增效，与DOT1L抑制剂EPZ5676联合可逆转耐药表型，为MLL-r白血病提供了新型联合治疗策略。

　　

在血液恶性肿瘤的复杂图谱中，KMT2A重排白血病（MLL-r）始终占据着特殊而棘手的地位。这种由混合系白血病基因发生染色体易位所驱动的疾病，以其侵袭性强、复发率高著称，尤其常见于婴幼儿白血病患者中。尽管近年来针对menin-MLL蛋白相互作用和组蛋白甲基转移酶DOT1L的靶向药物展现出临床潜力，但耐药性的出现如同幽灵般萦绕，迫使科学家不断探寻新的治疗突破口。

正是在这样的背景下，Lola Badmus及其合作者将目光投向了EYA家族酪氨酸磷酸酶——一类兼具转录共激活功能和磷酸酶活性的特殊蛋白家族。早在前期研究中，EYA1已被发现与MLL融合蛋白复合物存在功能关联，但EYA家族磷酸酶活性是否能够成为MLL-r白血病的特异性治疗靶点，仍是一个待解之谜。这项发表于《Experimental Hematology & Oncology》的研究，系统揭示了EYA家族磷酸酶活性在MLL-r白血病中的关键作用，并意外发现已上市痛风药物benzbromarone（BBR）可通过抑制EYA活性发挥显著抗白血病效应。

研究团队采用细胞活力检测（Cell Titer Glo 2.0）、流式细胞术、RNA测序（RNA-seq）和小鼠白血病模型等关键技术方法，其中人类白血病细胞系包括MLL-r（MOLM-13、THP-1、SEM）和MLL-nr（U-937、Kasumi-1）亚型，小鼠模型采用MLL-AF9转基因骨髓细胞移植至亚致死剂量照射的受体小鼠。

抑制EYA PTP活性降低白血病细胞活力并改变转录调控

通过剂量反应曲线分析，BBR对表达EYA1和EYA3的MLL-r和部分MLL-nr白血病细胞系产生选择性杀伤作用，而对EYA表达水平极低的B-ALL细胞系（HB11;19、KOPN-8）和正常造血祖细胞（hCD34+）影响微弱。尤为重要的是，EYA1与EYA3表达总量与BBR的IC₅₀值呈显著负相关，提示这两种磷酸酶的表达水平可作为预测BBR治疗敏感性的生物标志物。

在机制层面，研究证实EYA磷酸酶活性抑制会导致RNA聚合酶II（RNA Pol II）C端结构域（CTD）酪氨酸1位点（Tyr1）磷酸化水平全局性升高。这一发现具有重要生物学意义，因为RNA Pol II CTD Tyr1磷酸化是转录延伸阶段的关键修饰，与Ser2磷酸化促进和转录方向性调控密切相关。在BBR敏感的MOLM-13和SEM细胞中，Tyr1磷酸化水平显著上升，而在耐药的KOPN-8细胞中则无此变化，表明EYA异常活性通过干扰转录调控参与白血病发生。

体内EYA抑制延缓疾病进展

动物实验结果显示，经BBR预处理48小时的MLL-AF9细胞其致白血病能力显著降低，移植后小鼠生存期明显延长。更令人鼓舞的是，在已建立白血病模型的体内治疗实验中，40 mg/kg剂量的BBR口服给药可显著延缓疾病进展、延长生存期并降低白血病负荷，且未观察到明显肝毒性反应，为BBR的临床转化提供了安全性依据。

EYA抑制诱导细胞周期阻滞与衰老

转录组分析表明，BBR处理主要影响细胞周期调控通路，特别是G1/S期转换过程。流式细胞术检测证实BBR可引起S期细胞比例减少和亚G₀期细胞增加，同时伴随细胞周期抑制蛋白p21（CDKN1A编码）表达上调。衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例显著增加，进一步证实细胞衰老是BBR抗白血病效应的重要机制之一。此外，研究还发现EYA抑制可激活凋亡和铁死亡等多条细胞死亡通路。

联合治疗策略增强疗效并克服耐药

协同作用分析显示，BBR与menin-MLL抑制剂VTP50469在MOLM-13细胞中产生强协同效应，与DOT1L抑制剂EPZ5676则呈现相加作用。尤为值得注意的是，EPZ5676预处理可使原本对BBR耐药的KOPN-8细胞产生敏感性，这为克服临床耐药提供了新思路。联合处理对正常hCD34+细胞无明显毒性，进一步支持了BBR治疗的特异性。

本研究首次系统论证了EYA家族酪氨酸磷酸酶活性作为MLL-r白血病治疗靶点的可行性，不仅为理解EYA在白血病转录异常中的作用提供了新视角，也为BBR的老药新用提供了坚实证据。研究提出的基于EYA表达水平的患者分层策略，以及BBR与现有靶向药物的联合治疗方案，有望为这一高危白血病亚型患者带来新的治疗希望。值得注意的是，尽管BBR已知存在多靶点作用，但DepMap数据库分析显示其他潜在靶点在AML或B-ALL细胞系中均非必需基因，强化了EYA家族抑制的特异性抗白血病效应。这一研究为临床转化奠定了坚实基础，也为转录调控异常相关的恶性肿瘤治疗提供了新范式。