转基因成分在膨化食品中的分子检测：以MON 810、CaMV P35S和NPT II为靶点 中文标题

《LWT》：Improved Methods for Detecting Genetically Modified Components in Puffed Cereal Products: Discovering Genetic Insights by PCR-RFLP, Real-Time PCR, and Sanger Sequencing.

本研究针对市售膨化食品中可能存在的转基因成分，利用PCR-RFLP、TaqMan实时荧光定量PCR及测序等技术，对384份样品进行了系统检测。结果发现相当比例的样品含有CaMV P35S启动子、NPT II标记基因和MON 810转基因事件，表明转基因原料在膨化食品工业中应用广泛。该研究为转基因食品的监管和消费者知情权提供了重要的科学依据。

　　

在当今食品工业中，膨化食品因其酥脆口感和丰富口味深受各年龄段消费者喜爱，尤其是儿童。然而，这些以谷物为原料的零食，其背后可能隐藏着消费者并不熟悉的“基因秘密”——转基因成分。随着生物技术的发展，转基因作物在全球范围内广泛种植，许多加工食品都可能含有这些经过基因修饰的原料。尽管转基因食品在增加产量、抗病虫害等方面具有优势，但其潜在的健康风险和生态影响仍引发广泛关注。

伊朗作为亚洲较早加入《卡塔赫纳生物安全议定书》的国家，虽然制定了生物安全法，但在转基因食品的标识和监管方面仍存在不足。特别是对于儿童经常食用的膨化食品，了解其是否含有转基因成分，对保障消费者权益和健康至关重要。然而，检测加工食品中的转基因成分并非易事，因为高温、高压和挤压等加工工艺会严重破坏DNA的完整性，给分子检测带来巨大挑战。

为了解决这一问题，研究人员开展了一项针对市售膨化食品中转基因成分的检测研究。该研究近期发表在食品科学领域重要期刊《LWT》上，系统评估了伊朗伊斯法罕市销售的膨化食品中转基因成分的存在情况。

研究人员从伊斯法罕市15个行政区的不同市场层面随机采集了384份含玉米和大豆的膨化食品样品，包括爆米花、玉米卷、膨化零食、奶酪泡芙等多种常见产品。研究团队采用了一系列先进的分子生物学技术进行检测分析。

关键技术方法包括：使用DNeasy mericon食品试剂盒提取基因组DNA，通过普通PCR扩增CaMV P35S、NPT II和MON 810等靶序列；利用PCR-RFLP（聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性）技术进行验证；采用TaqMan实时荧光定量PCR检测GTS-40-3-2特异性事件；通过TA克隆和Sanger测序确认PCR产物序列。这些方法的组合应用确保了检测结果的准确性和可靠性。

样品筛查

研究人员对384份膨化产品样品进行了全面筛查，重点关注三种常见的转基因标记：CaMV P35S启动子、NPT II（新霉素磷酸转移酶II）标记基因和MON 810转基因玉米事件。结果显示，24.3%的样品含有CaMV P35S，27%含有NPT II，38.8%含有MON 810。此外，对50份样品的进一步分析发现，20%含有GTS-40-3-2（耐草甘膦大豆）转基因事件。这些数据表明，转基因成分在伊朗市售膨化食品中普遍存在。

PCR分析

DNA提取质量是分子检测的关键。研究人员发现，经过激烈加工处理的膨化食品中DNA浓度较低（平均36.5±27.3 ng/μL），且差异较大，这反映了食品加工过程对DNA完整性的影响。尽管如此，通过优化PCR反应条件和引物设计，研究成功扩增出了预期的DNA片段：CaMV P35S（195 bp）、NPT II（215 bp）和MON 810（170 bp）。琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳结果清晰显示了特异性条带，证实了目标序列的存在。

PCR-RFLP分析

为了进一步验证PCR结果的准确性，研究人员采用了限制性内切酶消化分析。NPT II的PCR产物经Rsa I酶切后产生93 bp和122 bp两个片段；MON 810的产物经Hae III酶切产生126 bp和44 bp片段，经Mwo I酶切产生109 bp和61 bp片段；CaMV P35S的产物经Xmn I酶切产生80 bp和115 bp片段。所有这些酶切片段大小均与预期一致，通过银染法在聚丙烯酰胺凝胶上清晰可见，充分证实了检测结果的可靠性。

测序验证

最终的测序分析为转基因成分的存在提供了最直接的证据。Sanger测序结果显示，膨化食品样品中确实含有CaMV P-35S启动子、NPT II标记基因和MON 810转基因序列。这些序列与已知的转基因元件完全匹配，为研究结论提供了分子水平的坚实证据。

本研究通过多种分子生物学技术的联合应用，系统评估了伊朗市售膨化食品中转基因成分的存在情况。研究结果表明，相当比例的膨化食品含有转基因成分，包括CaMV P35S启动子、NPT II标记基因、MON 810和GTS-40-3-2等常见转基因事件。这一发现具有重要意义，不仅揭示了转基因原料在食品工业中的广泛应用，也为转基因食品的监管和标识提供了科学依据。

值得注意的是，食品加工过程中的高温、高压等条件会对DNA造成损伤，影响检测的准确性。本研究通过优化DNA提取方法、设计合适的靶序列长度以及采用多种验证手段，有效克服了这些挑战，建立了一套可靠的转基因食品检测方案。

随着转基因作物的不断发展和基因叠加品种的出现，转基因食品的检测将面临新的挑战。未来，测序技术的进步、多重筛查平台的整合以及区块链溯源技术的应用，将进一步提高转基因食品检测的准确性和效率。同时，加强转基因食品的标识管理，提高消费者知情权，是保障公众健康的重要措施。

这项研究不仅为转基因食品的检测提供了技术参考，也为相关政策的制定提供了科学依据，对促进食品安全监管和消费者保护具有积极意义。