基于实时荧光定量PCR技术的骆驼奶中牛奶掺假定量检测方法研究

《International Dairy Journal》：Real-time PCR assay for quantitative detection of cow milk adulterants in camel milk

本文开发了一种基于实时荧光定量PCR（real-time PCR）的技术，通过靶向细胞色素b（Cytochrome b）基因片段，实现了骆驼奶中牛奶掺假的快速、灵敏定量检测。该方法检测限（LOD）达1%，定量限（LOQ）分别为牛乳1.5x10-5 ng/μL、骆驼乳2x10-5 ng/μL，为骆驼乳制品真实性鉴定提供了可靠技术支撑。

　　

亮点

DNA提取质量验证

从牛乳和骆驼乳样本中提取的基因组DNA的成功与否，直接关系到PCR（聚合酶链式反应）技术的成败。扩增出的线粒体细胞色素b（cytb）基因（分别从牛和骆驼中）证明了DNA的完整性。这通过代表性的琼脂糖凝胶电泳检测得以证实（图1）。结果显示单一、清晰、一致的条带，表明样本完整性高，无拖尾或扩散现象。这表明为DNA提取设计的方案是成功的。

结论

总之，本研究成功证明，使用针对细胞色素b（Cytb）基因的自设计引物，在优化条件下，通过单重PCR（simplex PCR） assay可以实现骆驼乳和牛乳的物种特异性检测。基于这些结果，开发了一种SYBR Green为基础的实时荧光定量PCR（realtime PCR）检测方法，能够以高特异性对骆驼和牛的DNA进行绝对定量。值得注意的是，该实时荧光定量PCR方法非常灵敏，足以在低至2x10^-5 ng/μL（骆驼）和1.5x10^-5 ng/μL（牛）的稀释度下检测到物种特异性DNA。该方法在检测骆驼奶中是否存在牛奶掺假方面显示出巨大潜力，定量限（LOQ）和检测限（LOD）均令人满意。该方法快速、灵敏、特异且可靠，可用于商业骆驼奶产品的常规质量控制和认证。