通过LC-MS技术在一种IgG1单克隆抗体中发现了一种新的C端序列变异

《Journal of the American Society for Mass Spectrometry》：A Novel C-terminal Sequence Variant Discovered in an IgG1 Monoclonal Antibody by LC-MS

单克隆抗体治疗药物中通过质谱发现新型序列变异（Val-Ala替换），质谱验证及mRNA剪接机制分析表明异常剪接位点位于甘氨酸编码区，高分辨质谱和 alternate fragmentation方法有效解决同位素歧义问题，密码子优化显著影响变异谱特征。

　　

序列变异分析对于表征生物治疗药物以及确保产品质量、一致性和安全性至关重要。在对一种IgG1单克隆抗体进行治疗性分析时，我们发现了一个新的变异体，其重链C末端的质量增加了113道尔顿。该变异体的丰度异常高，达到了1.5%。最初的假设认为可能是亮氨酸/异亮氨酸（Leu/Ile）的添加所致；然而，通过HCD多级串联质谱分析发现实际上是缬氨酸（Val）和丙氨酸（Ala）的替换。具有该假设序列的合成肽证实了这一新的序列变异体，其保留时间和碎片化模式完全一致。进一步的研究表明，潜在的机制可能是mRNA剪接异常，具体是在表达构建物中靠近甘氨酸编码密码子的位置存在一个隐性的剪接位点。这些发现强调了高分辨率质谱技术和替代性碎片化方法在解决同位素不确定性方面的作用，并突显了密码子优化对序列变异谱的影响。