利用蛋白质组学方法对来自肝S9的胰岛素及其代谢物中的二硫键进行全面表征

《Journal of Proteome Research》：Comprehensive Characterization of Disulfide Bonds in Insulin and Its Metabolites from Liver S9 by a Proteomic Method

二硫键重排的蛋白质组学鉴定策略研究，通过低温酶解和LC-HRMS结合pLink软件，首次完整解析胰岛素及其代谢物中天然和非重排二硫键结构，发现41个代谢物存在二硫键重排现象，并采用mCPBA氧化验证及还原/烷基化修饰确认。

　　

二硫键对于治疗性肽（TPPs）的结构和功能完整性至关重要。然而，由于样品制备过程中二硫键的重组，准确绘制TPPs中的二硫键仍然具有挑战性。此外，识别含有二硫键的TPP代谢物对于临床前和临床开发也非常重要。然而，现有的代谢物识别软件只能识别具有天然二硫键的代谢物，尽管有证据表明代谢物中存在非天然二硫键。这凸显了开发一种全面分析TPP代谢物策略的必要性。在这项研究中，基于pLink软件的蛋白质组学策略被用于表征大鼠肝脏S9中的胰岛素及其代谢物中的二硫键。通过0°C下的消化处理以及随后的液相色谱-高分辨率质谱（LC-HRMS）分析，所有胰岛素的二硫键都被成功识别，且没有发生二硫键的重组。对于其代谢物，在与胰岛素孵育后，从大鼠肝脏S9中鉴定出了118种代谢物，其中包括41种发生二硫键重组的代谢物。通过还原和烷基化这些代谢物，并使用过氧化甲氯苯甲酸（mCPBA）氧化二硫键，成功验证了这些发生二硫键重组的胰岛素代谢物，从而促进了它们的断裂。这项研究为可靠且全面地表征含有二硫键的TPPs及其代谢物提供了一种新的策略。