二神丹通过调控NOTCH1/NF-κB/NLRP3通路抑制M1巨噬细胞极化抗动脉粥样硬化的机制研究

《Chinese Medicine》：Ershen Dan attenuates atherosclerosis by modulating the NOTCH1/NF-κB/NLRP3 signaling pathway to suppress M1 macrophage polarization

本研究针对动脉粥样硬化（AS）这一慢性炎症性疾病，探讨中药复方二神丹（ESD）的治疗机制。研究人员通过体内外实验结合网络药理学分析，发现ESD及其活性成分（人参皂苷Rg1和丹参酮IIA）可通过抑制NOTCH1/NF-κB/NLRP3信号通路，减少巨噬细胞内活性氧（ROS）生成，从而抑制M1型巨噬细胞极化及炎症因子分泌，延缓AS进展。该研究为ESD的临床应用提供了分子水平证据，并为中药多靶点治疗AS提供了新思路。

　　

心血管疾病是全球首要死因，而动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）是其核心病理基础。AS是一种慢性炎症性疾病，巨噬细胞在疾病进展中扮演双重角色：促炎的M1型巨噬细胞加剧斑块不稳定性，而抗炎的M2型巨噬细胞促进斑块稳定。当前一线药物虽能降脂抗炎，但存在肝肾功能损伤风险。传统中药复方二神丹（Ershen Dan, ESD）由人参（Panax ginseng C.A. Mey）和丹参（Salvia miltiorrhiza Bge）组成，在临床中显示抗AS疗效，但其具体机制尚未明确。

为揭示ESD的作用机制，研究人员综合运用超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS/MS）分析ESD化学成分，通过ApoE^-/-小鼠模型评估ESD对血脂、炎症因子及主动脉斑块的影响，并结合网络药理学、分子动力学模拟及细胞实验（RAW264.7巨噬细胞）探讨其关键靶点与通路。主要技术方法包括：动物模型构建（ApoE^-/-小鼠高脂饲料诱导）、血清生化与ELISA检测、组织染色（油红O、HE、Masson、天狼星红）、Western blot、免疫组化、细胞活力检测（CCK-8法）、免疫荧光、活性氧（ROS）探针检测及实时定量PCR（qRT-PCR）。

ESD化学成分鉴定与体内抗AS效果

通过UPLC-Q-Exactive-MS/MS分析，从ESD中鉴定出20种活性成分，包括人参皂苷Rg₁和丹参酮II_A。体内实验显示，ESD中、高剂量组（ESD-M、ESD-H）显著降低ApoE^-/-小鼠血清低密度脂蛋白（LDL）、总胆固醇（TC）及炎症因子IL-6、TNF-α水平，并减少主动脉斑块面积（油红O染色）和改善斑块稳定性（HE、Masson染色）。

网络药理学与分子对接揭示关键靶点

网络药理学分析筛选出ESD的135个作用靶点，与AS相关靶点交集后确定TNF-α、IL-6、AKT1等为核心靶点。KEGG富集分析提示ESD可能通过TNF、PI3K/AKT等通路调控炎症。分子对接显示人参皂苷Rg₁和丹参酮II_A与TNF-α、IL-6具有高结合活性（结合能≤-7.2 kcal/mol）。

ESD通过NOTCH1/NF-κB/NLRP3通路抑制巨噬细胞炎症

Western blot结果显示，ESD-H组显著抑制小鼠主动脉组织中NOTCH1、HES1、NLRP3及磷酸化NF-κB p65蛋白表达。免疫组化证实ESD降低主动脉斑块内M1型巨噬细胞标志物CD86的表达，表明ESD可能通过阻断NOTCH1/NF-κB/NLRP3信号环路抑制巨噬细胞M1极化。

活性成分RA调控M1巨噬细胞极化机制

体外实验表明，人参皂苷Rg₁（20 μg/mL）联合丹参酮II_A（10 μg/mL）（简称RA）可抑制LPS/IFN-γ诱导的M1巨噬细胞标志物COX-2、iNOS表达，降低细胞内ROS水平，并下调NOTCH1/HES1、NOX2及NLRP3的蛋白与mRNA表达。分子动力学模拟进一步验证RA与TNF-α形成稳定复合物，主要通过范德华力与疏水相互作用结合。

结论与意义

本研究首次阐明ESD通过调控NOTCH1/NF-κB/NLRP3信号轴，抑制巨噬细胞M1极化及ROS生成，从而缓解AS炎症微环境。其活性成分人参皂苷Rg₁和丹参酮II_A是发挥抗AS作用的关键物质。该研究不仅为ESD的临床应用提供实验依据，也凸显中药多成分、多靶点治疗复杂疾病的优势。未来需进一步验证其他成分的协同效应及临床安全性。