双平台流式细胞术在CAR-T细胞定量中的初步评估：面向临床常规应用与认证标准

《Journal of Immunological Methods》：Preliminary evaluation of a whole blood dual-platform flow cytometry protocol for CAR-T cell quantitation: Toward accreditation and clinical routine application

本研究首次系统评估了基于全血双平台流式细胞术（FCM）的CAR-T细胞定量方案在三种流式细胞仪（DxFLEX/Navios/Navios EX）上的性能。验证结果显示该方案在检测CD19/BCMA CAR-T细胞时具有优异的重现性（CV<10%）、无交叉反应性，且试剂用量可优化至0.5?μL。研究为流式细胞术在CAR-T细胞临床监测（符合ISO?15189标准）的标准化应用提供了关键实验依据。

　　

Highlight

本研究亮点在于首次系统验证了全血双平台流式细胞术（FCM）在CAR-T细胞定量中的标准化性能，为临床实验室的常规应用与认证（ISO?15189）提供关键数据支撑。

患者

外周血样本随机取自常规检测样本，使用K₃EDTA抗凝管（Becton?Dickinson）采集，于22–25?°C保存并在24?小时内分析。研究共纳入139份血液样本，涵盖118例接受抗CD19或抗BCMA CAR-T细胞治疗的淋巴瘤/骨髓瘤成年患者，其循环CAR-T细胞比例范围分别为<1%至81%（CD19）和<1%至79%（BCMA）。

CAR-T细胞百分比测定方案的建立

通用设门策略如图1所示（注：图示已省略）。通过12份高/低CAR-T细胞比例样本对比发现，Versalyse?与Optilyse? C两种溶血试剂检测CD19?CAR-T细胞百分比结果高度一致（图2）。

对9例患者样本进行CD19/BCMA?CAR检测试剂滴定实验显示，使用2?μL、1?μL或0.5?μL试剂时CAR-T细胞百分比无显著差异，最终确定0.5?μL为最优用量。

讨论

本研究在常规实验室条件下系统分析了CD19/BCMA?CAR-T细胞百分比测定的各项参数，并依据ISO?15189指南与AFC建议评估了Navios、Navios?EX和DxFLEX流式细胞仪的性能。结果表明，三种仪器均可可靠完成CAR-T细胞百分比测定，且检测结果高度相关。值得注意的是，样本采集后若延迟超过1天进行染色，或染色细胞在4?°C保存超过3天，CAR-T细胞百分比会显著下降，提示严格把控样本处理时效对结果可靠性至关重要。

结论

我们建立的双平台全血流式细胞术方案在BCMA与CD19?CAR-T细胞定量中表现稳定可靠，适用于不同流式细胞仪平台，符合临床实验室常规应用与ISO?15189认证要求。