IDSP-IA：免疫触发双茎环探针介导的等温扩增技术用于阿托摩尔级蛋白质定量

《Analytical Chemistry》：IDSP-IA: Immunotriggered Double Stem-Loop Probe-Mediated Isothermal Amplification for Attomolar Protein Quantification

免疫触发双茎环探针介导的等温扩增方法实现蛋白质超灵敏检测，包含抗体捕获、信号转换和通用扩增模块，临床验证显示与常规检测方法高度一致。

　　

对低丰度蛋白质进行超灵敏定量对于疾病的全面管理至关重要，但这仍然是一个重大挑战。在此，我们提出了一种基于免疫触发双茎环探针介导的等温扩增（IDSP-IA）方法，用于实现高灵敏度和特异性的蛋白质检测。IDSP-IA方法由三个模块化组件组成：用于目标捕获的单克隆捕获抗体（mAb1）包被的反应管、用于信号转导的适配体-寡核苷酸开关（Apt-OS），以及通用的双茎环介导的等温扩增模块。在目标蛋白质被捕获并富集到mAb1包被的反应管中后，Apt-OS将无法被扩增的蛋白质信号转化为核酸触发剂，从而启动高效的指数级扩增。得益于这种模块化设计，该方法通过简单更换抗体/适配体对即可灵活适应不同的蛋白质，同时保持扩增组件的不变性。我们已经证明，IDSP-IA方法具有宽动态范围（5 fg/mL至50 pg/mL），检测限（LOD）为α-胎蛋白（AFP）1.3 fg/mL和白细胞介素-6（IL-6）1.4 fg/mL，并且不会与其他常见血清蛋白质发生交叉反应。更重要的是，使用人类血清样本进行的临床验证显示，该方法与常规使用的电化学发光和化学发光免疫测定方法具有极好的一致性。这些优势，包括高特异性、超灵敏度、模块化设计和通用性，使得IDSP-IA方法成为一种强大且灵活的工具，能够在诊断和生物医学领域实现精确的阿托摩尔级蛋白质生物标志物定量。