基于实时荧光的脱氨测定的开发以及人类胞苷脱氨酶抑制剂的鉴定

《ACS Chemical Biology》：Development of a Real-Time Fluorescence-Based Deamination Assay and Identification of Inhibitors of Human Cytidine Deaminase

胞苷类似物作为抗病毒和抗癌药物存在被CDA酶代谢失效的问题，本研究开发基于同源核苷类似物的实时荧光检测方法，成功筛选出两种低微摩尔（200-300 μM）且高配体效率（>0.3）的CDA抑制剂，为药物优化提供新靶点。

　　

胞苷类似物作为高效的抗代谢药物，在抗病毒和抗癌领域具有广泛的应用价值。然而，在许多情况下，人体内的胞苷脱氨酶（CDA）会将基于胞苷的抑制剂转化为无活性的尿苷代谢物，从而降低其药效。通过抑制CDA的快速降解，可以增强含有胞苷的药物的效果。为了开发CDA抑制剂，并出于对胞苷脱氨酶本身的研究兴趣，我们采用同构核苷类似物开发了一种基于实时荧光的脱氨活性检测方法。我们制备了经过修饰的嘧啶核苷，这些核苷在作为胞苷或尿嘧啶核碱基时表现出不同的荧光特性。研究发现，5-苯并-2-呋喃基-2′-脱氧胞苷在CDA酶活性检测中是最佳的荧光报告分子，能够详细测量存在或不存在抑制剂时CDA的酶活性动力学。利用该检测方法，我们筛选了自家收集的1054个化合物片段，发现了23个具有潜在活性的候选分子，这些分子将进一步用于抑制剂的研究。其中两种CDA抑制剂具有较低的微摩尔浓度（200–300 μM）和良好的配体效率（>0.3），为未来的抑制剂开发提供了有希望的起点。