GlycoFASP：一种用于O-糖蛋白组学分析的复杂混合物制备通用方法

《Analytical Chemistry》：GlycoFASP: A Universal Method to Prepare Complex Mixtures for O-Glycoproteomic Analysis

1. 开发了一种高效的一步O-糖基化蛋白纯化方法GlycoFASP，通过双切割酶和分子筛膜选择性分离O-糖基化肽段，显著提升信号比并优于传统方法。

　　

由于糖基化的组成、连接方式及定位存在显著异质性，糖蛋白组学分析仍然面临诸多挑战。在研究O-糖基化（主要发生在丝氨酸或苏氨酸残基上）时，这些问题更加复杂，因为缺乏统一的肽序列模式，且O-糖基位点彼此靠近。基于质谱（MS）的分析方法是研究O-糖蛋白的首选技术，但通常需要预先进行分离或富集操作。O-糖基化性质的多样性至今阻碍了通用糖缀合物富集方法的开发。为解决这一问题，我们开发了GlycoFASP——一种一步法制备O-糖蛋白的技术，仅需1毫克样品且对蛋白质纯化要求较低。该方法利用具有双重肽-糖链切割功能的O-糖蛋白酶，在分子量截留（MWCO）过滤器上对糖蛋白进行选择性蛋白水解，从而分离出O-糖肽。整个过程可在一天内完成，既可以富集样本中的所有O-糖蛋白，也可以仅富集具有特定O-糖链结构的肽段。在人类血清、精液和细胞培养基的分析中，GlycoFASP能够几乎完全去除非O-糖基化的蛋白质，其中超过70%的蛋白质信号来自O-糖蛋白。我们将该方法与其他常见富集方法（如糖链结合蛋白（GBP）、强阴离子交换（SAX-ERLIC）及另一种基于消化的策略）进行了比较。结果显示，GlycoFASP检测到的O-糖肽数量是其他方法的两倍以上。凭借其操作简便、试剂易获取以及低成本的优势，我们相信该方法将极大推动糖科学的研究进展，使非糖蛋白组学领域的专家也能开展相关分析。