通过共价标记和质谱技术对酸性氨基酸残基进行选择性探测，以用于蛋白质结构分析

《Analytical Chemistry》：Selective Probing of Acidic Amino Acid Residues for Protein Structural Analysis by Covalent Labeling and Mass Spectrometry

化学标签策略选择性标记天冬氨酸/谷氨酸，克服传统方法非特异性及副产物问题，通过DPDAM试剂实现单步标记，产氮气副产物，质谱验证有效，适用于结构生物学研究。

　　

我们提出了一种针对天冬氨酸（D）和谷氨酸（E）残基进行特异性生物偶联的化学标记方法，这对于阐明它们在蛋白质-蛋白质相互作用中的作用以及潜在的治疗干预措施至关重要。传统的使用碳二亚胺的方法受到非特异性和副产物生成的限制，因此我们开发了二苯基重氮甲烷（DPDAM）这种试剂，它能够通过单一试剂完成修饰。我们证明了该试剂在pH 4条件下选择性标记Asp和Glu的有效性，并且在更低pH值下可以实现C端特定羧酸的修饰。值得注意的是，这种方法能够将酸高效转化为酯类，且唯一的副产物是分子氮。通过串联质谱验证了标记肽样品的碎片化特征。利用模型肽和蛋白质（包括缓激肽、神经紧张素、血管紧张素I、牛血清白蛋白（BSA）以及猫过敏原Fel d 1蛋白复合物），我们展示了该方法在结构生物学研究中探测活性酸性残基的多功能性和适用性。这一创新为精确标记Glu和Asp残基提供了新的途径，有助于深入理解蛋白质的结构和功能，并识别潜在的治疗靶点。