人唾液中TMAO及其四种前体的LC-MS/MS同步定量新方法建立与临床应用研究

《Journal of Chromatography B》：Establishment of a LC-MS/MS method for the simultaneous quantitative determination of trimethylamine N-oxide and four precursors in human saliva

本文首次建立了一种同步定量检测人唾液中氧化三甲胺（TMAO）及其前体（胆碱、γ-丁酰甜菜碱、甜菜碱、左旋肉碱）的LC-MS/MS方法。该方法经CLSI C62-A标准验证，线性范围覆盖0.005-100 μmol/L，精密度（1.13%-10.65%）和回收率（94.31%-108.00%）优异，成功应用于43名健康者和4名冠心病（CHD）患者的唾液检测，为疾病早期预警提供了无创分析方案。

　　

^亮点

^{化学品与试剂}

胆碱（CHL，纯度100%）、氧化三甲胺（TMAO，纯度95%）、γ-丁酰甜菜碱（GBB，纯度95%）和左旋肉碱（CAR，纯度98%）标准品购自德国默克Sigma-Aldrich。甜菜碱（BET，纯度98%）购自中国的Acmec公司。同位素内标CHL-d9（97%）、TMAO-d9（98%）、GBB-d9（96%）、BET-d3（98%）和CAR-d3（98）则来自加拿大的Toronto Research Chemicals公司。

乙腈（HPLC级）购自美国Thermo Fisher Scientific公司。甲酸铵（99.995%）和...

^{LC-MS/MS分析}

CHL、TMAO、GBB、BET和CAR的保留时间（RT）分别为1.86分钟、1.92分钟、2.43分钟、2.95分钟和3.27分钟（附图S1）。每个样品的总运行时间仅为6分钟，堪称高效！所有分析物均在电喷雾正离子（ESI⁺）和多反应监测（MRM）模式下进行分析。定量采用了内标法，确保了结果的准确性。这种结合了短运行时间和简单前处理过程的LC-MS/MS方法，能够同时实现对五种物质快速而高效的分析。

^方法验证

线性回归采用1/x加权...

^讨论

唾液腺被丰富的毛细血管和腺泡包围，具有高度通透性，便于分子交换。因此，血液中循环的生物标志物可以进入腺泡，并最终分泌到唾液中。唾液采集相对无创且简单，患者只需按照既定程序即可自行采集样本，无需专业协助。这使得样本可以在情绪稳定的状态下采集，从而为临床诊断提供了更可靠的生物标志物浓度信息。

^结论

本研究首次建立了一种新颖、快速的LC-MS/MS方法，用于检测人唾液中的TMAO及其四种前体。该方法已应用于分析43名健康成年志愿者和4名冠心病（CHD）住院患者的唾液样本，初步揭示了这五种分析物在健康个体和CHD患者中的分布特征。