通过免疫蛋白质组学方法鉴定具有潜在诊断价值的Scedosporium boydii抗原（在囊性纤维化患者中可能具有应用价值）

《Journal of Rare Earths》：Immunoproteomic Identification of Scedosporium boydii Antigens with Potential Diagnostic Interest in Cystic Fibrosis Patients

囊性纤维化患者肺部感染性曲霉样真菌（Scedosporium/Lomentospora）的血清学诊断方法研究。采用免疫组学结合质谱技术分析S. boydii全细胞蛋白提取物，发现22种特异性蛋白抗原，其中热休克蛋白70（Hsp70）、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（Pgd）、3-酮酰基-CoA硫解酶（Kat）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（Pck）被鉴定为高特异性、高免疫原性标志物，且与其他真菌（如Aspergillus）交叉反应率低。通过小鼠感染模型验证了Hsp70等抗原在急性感染中的免疫原性。数据已上传至ProteomeXchange（PXD053392）。

　　本研究探讨了如何通过特定抗原识别技术提高对囊性纤维化（CF）患者中由*Scedosporium*/*Lomentospora*属真菌引起的感染的诊断准确率。由于这些真菌在CF患者呼吸道中广泛存在，目前的诊断方法如免疫电泳和ELISA等，因缺乏标准化和商业化，常常出现交叉反应，导致误诊和漏诊。因此，识别更具特异性的抗原成为改善诊断的关键。

研究采用了免疫蛋白质组学的方法，结合二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）、Western blot和质谱分析等技术，分析了*S. boydii*的抗原谱。结果显示，有22种蛋白质在CF患者血清中被识别，而这些抗原并未被CF患者或小鼠中*Aspergillus* spp.感染所识别。这些蛋白质主要参与代谢过程，表现出催化活性。其中，最常被识别的抗原包括热休克蛋白70、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、3-酮酰基辅酶A硫解酶和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶，这些抗原被67-81%的CF患者血清识别，且对阴性样本的交叉反应极低。这表明这些抗原具有良好的诊断潜力。

研究进一步分析了这些抗原的生物信息学特征，发现它们在真菌细胞中主要分布于细胞质，部分与细胞核和线粒体相关。这些抗原的分子功能包括催化活性和结合功能，其中催化活性主要与氧化还原反应有关。此外，这些抗原的亚细胞定位表明，它们可能通过非经典途径分泌，或具有粘附特性。这些特性使得它们成为未来诊断方法的重要候选。

在对小鼠感染模型的分析中，研究发现*S. boydii*的抗原主要被识别，而与*A. fumigatus*感染的小鼠血清交叉反应较弱。这表明*S. boydii*的抗原具有较高的特异性。研究还发现，Hsp70在小鼠感染模型中是最常见的抗原，而在CF患者血清中，80.95%的阳性样本识别了Hsp70，仅有少数阴性样本产生反应。这表明Hsp70在诊断中具有重要作用。

此外，研究还发现，其他抗原如Pgd、Kat和Pck在CF患者和小鼠感染模型中均表现出较高的识别率。这些抗原的识别率支持其作为诊断靶点的潜力。研究还发现，这些抗原在真菌中的分布和功能特征表明，它们可能参与真菌的代谢过程，以及应对环境和宿主压力的机制。这些特性使得它们成为研究真菌致病机制和开发新型诊断工具的重要对象。

综上所述，本研究通过免疫蛋白质组学方法，识别了*S. boydii*的多个抗原，这些抗原具有较高的特异性和诊断价值。研究结果表明，Hsp70、Pgd、Kat和Pck是具有潜在诊断意义的抗原，它们在CF患者和小鼠感染模型中均表现出较高的识别率。这些抗原的特异性、功能特征和分布情况支持其作为新型诊断靶点的研究。未来的研究可以基于这些抗原开发新的诊断方法，提高对*Scedosporium*/*Lomentospora*感染的识别准确率。