miRNA-26a纳米颗粒靶向治疗肝细胞癌的临床前研究：机制探索与疗效验证

《Liver Research》：Therapeutic potential of miRNA-26a-encapsulated nanoparticles against hepatocellular carcinoma in a murine model

本研究针对肝细胞癌(HCC)缺乏高效低毒疗法的难题，开发了miRNA-26a封装纳米颗粒，通过动物实验证实其可显著抑制肿瘤生长、促进癌细胞凋亡并恢复肝功能指标，为 miRNA 替代疗法提供新策略。

　　

肝细胞癌（HCC）是全球范围内发病率和死亡率极高的恶性肿瘤，每年新增病例约90.6万例，死亡病例达83万例，位居癌症相关死因第三位。由于早期诊断困难、治疗抵抗性强及高复发率等特点，HCC患者预后极差。目前早期HCC可通过手术切除、消融或肝移植等手段治疗，但仅30%-40%患者符合条件；晚期患者则缺乏根治性手段，传统化疗效果有限且毒副作用显著。即便靶向药物如索拉非尼（Sorafenib）和瑞戈非尼（Regorafenib）可延长生存期，但其疗效短暂且易产生耐药性。因此，开发新型高效低毒疗法迫在眉睫。

近年来，微小RNA（miRNA）作为基因表达调控的关键分子，在肿瘤发生发展中扮演重要角色。其中miRNA-26a被证实具有肿瘤抑制功能，可通过调控细胞增殖、凋亡、血管生成等多条通路抑制肝癌进展。然而，裸露的miRNA易降解、靶向性差，限制其临床应用。纳米载体技术能有效保护miRNA、延长其循环时间并提升靶向递送效率，为 miRNA 疗法带来突破契机。在此背景下，本研究团队在《Liver Research》发表论文，系统评估了miRNA-26a封装纳米颗粒在HCC小鼠模型中的治疗潜力。

研究团队采用Span-油胺-硫酸软骨素构建纳米载体，通过体外细胞毒性实验（MTT法）验证miRNA-26a及其纳米制剂对HepG2细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）。体内实验选取80只雄性BALB/c小鼠，通过二乙基亚硝胺（DEN）诱导构建HCC模型，并分为对照组、HCC组、游离miRNA-26a治疗组和miRNA-26a纳米颗粒治疗组。治疗期间监测小鼠体重变化，结束后采集血清和肝组织进行生化指标检测（ALT、AST、AFP等）、基因表达分析（qPCR）、组织病理学（H&E染色）和免疫组化（cyclin D1、Ki67等蛋白检测）评估。

3.1. 纳米载体构建与miRNA封装

纳米颗粒粒径为151.8±7.6 μm，zeta电位为34.5±0.9 mV，具备良好稳定性与载药能力。

3.2. 细胞毒性验证

miRNA-26a与纳米颗粒的IC₅₀分别为90.28 nmol和86.82 nmol，两者对HepG2细胞的抑制效果无显著差异，而空白纳米颗粒无毒性，证实载体生物相容性。

3.3. HCC模型成功建立

DEN诱导组小鼠肝脏呈现结节状改变，血清ALT、AST、AFP水平显著升高，组织病理学确认HCC特征。

3.4. 动物健康状况改善

HCC组小鼠体重增重百分比（BWG%）显著低于对照组（21.38% vs. 57.70%），而miRNA-26a纳米颗粒治疗组BWG%恢复至43.55%，接近正常水平。

3.5. 生化指标恢复

HCC组肝功能指标（ALT、AST、ALP等）异常升高，肿瘤标志物（AFP、DCP）及血管生成因子（VEGF、TNF-α）显著上调。miRNA-26a纳米颗粒治疗组各项指标均接近对照组，效果优于游离miRNA-26a。

3.6. 基因表达调控

HCC组miRNA-26a表达显著下调，而治疗组其表达恢复。同时，癌相关基因（P70S6K、TGF-β、DNMT3b、Caspase-3）在HCC组中高表达，经纳米颗粒治疗后显著抑制。

3.7. 组织病理学改善

HCC组肝组织结构破坏，细胞核异型性明显；miRNA-26a治疗组出现坏死和炎症细胞浸润；纳米颗粒治疗组则几乎完全恢复正常肝架构。

3.8. 免疫组化验证

HCC组cyclin D1、HepPar 1、arginase 1和Ki67蛋白表达显著升高，纳米颗粒治疗组这些蛋白表达被有效抑制，进一步证实其抗增殖与促凋亡作用。

本研究通过多维度实验证实，miRNA-26a纳米颗粒可有效逆转HCC进展，其机制涉及抑制血管生成（VEGF/P70S6K通路）、调控表观遗传（DNMT3b）、诱导凋亡（Caspase-3）及抑制细胞增殖（cyclin D1/Ki67）。值得注意的是，纳米载体显著提升miRNA-26a的稳定性和靶向性，疗效优于游离miRNA。尽管该策略在动物模型中取得突破，但其临床转化仍需解决靶向递送特异性、长期安全性等问题。综上所述，本研究为 miRNA 替代疗法在HCC治疗中的应用提供了坚实的前临床证据，有望推动基于纳米技术的基因治疗走向临床。