巴基斯坦山羊奶及流产胎儿组织中弓形虫分子检测与基因分型研究

《Food and Waterborne Parasitology》：Molecular detection and genetic characterization of toxoplasma gondii in goats' milk and aborted goat kid tissues from Pakistan

本研究针对巴基斯坦南旁遮普地区生山羊奶消费引发的弓形虫感染风险，通过实时荧光定量PCR和巢式PCR技术对360份奶样及流产组织进行检测，发现3.9%奶样呈T. gondii DNA阳性，流产组织阳性率达83.3%，基因分型显示以II型为主。该研究为生乳安全监管和弓形虫病防控提供了重要科学依据。

　　

在巴基斯坦南旁遮普地区，山羊养殖业占据着经济重要地位，而当地居民普遍有饮用生山羊奶的习惯。这种饮食习惯背后隐藏着一个严峻的公共卫生问题——弓形虫（Toxoplasma gondii）感染风险。弓形虫是一种广泛存在的食源性寄生虫，不仅会导致人类疾病，更是引起反刍动物流产的重要病原体。以往研究表明，该地区孕妇中弓形虫感染率高达12.6%，且与妊娠失败密切相关，而饮用生奶被确认为重要危险因素。尽管邻国伊朗已有山羊奶中弓形虫检测的报道，但巴基斯坦相关数据极为有限，特别是缺乏对流行菌株基因特征的深入了解。

为此，来自意大利福贾大学农业、食品、自然资源与工程系的研究团队在《Food and Waterborne Parasitology》上发表了最新研究成果。该研究选取了先前血清学调查中弓形虫抗体阳性率最高的三个农场（50%-83%），采用纵向采样设计，在三个不同泌乳阶段（15-30天、90天和>120天）采集了40只山羊的360份奶样。同时，收集了3例流产山羊胎儿的脑组织和胎盘组织样本（共6份）。研究团队建立了系统的实验室检测流程：首先通过离心富集奶样中的体细胞，采用商业试剂盒提取DNA；随后运用靶向弓形虫529-bp重复序列的实时荧光定量PCR（qPCR）进行初步筛查；对阳性样本进一步采用巢式PCR（nested-PCR）扩增四个基因标记（GRA6、SAG1、5’-SAG2、CS3），并通过测序比对进行基因分型。

研究结果揭示了重要发现。在奶样检测方面，14份样本呈现弓形虫DNA阳性，总阳性率为3.9%。特别值得注意的是，阳性率随着泌乳阶段推进而升高：早期泌乳阶段仅为0.8%，中期升至4.2%，而后期（>120天）达到6.7%。每个阳性山羊仅在一个泌乳阶段检测为阳性，提示虫体排放可能具有瞬时性。农场间差异也较为明显，阳性率从2.5%到5.8%不等。在流产组织检测方面，除一份胎儿脑组织外，其余5份样本（83.3%）均检测到弓形虫DNA，表明弓形虫是当地山羊流产的重要病原。

基因分型结果呈现出有趣的模式。巢式PCR显示四个基因标记的扩增效率存在差异：GRA6最高（73.7%），其次为SAG1（68.4%）、5’-SAG2（57.9%）和CS3（52.6%）。绝大多数奶样（13/14）和流产组织（4/5）中鉴定出的弓形虫基因型为II型，这与全球流行趋势一致。然而，在少数样本中出现了基因型判别模糊的情况：一份奶样的5’-SAG2标记无法明确区分I型或II型；多份样本的SAG1序列与II型或III型高度同源；尤为重要的是，流产组织样本的CS3标记分析显示与I型或III型关系更近，而奶样中均未发现此类基因型。

讨论部分深入分析了这些发现的科学意义。泌乳后期阳性率升高的现象可能与动物此时面临的生理应激、免疫抑制以及激素变化有关，这些因素可能促进潜伏感染的重新激活。农场间差异则反映了管理实践、生物安全措施和猫科动物接触机会等影响因素的重要性。基因分型结果的差异提示当地可能存在多种弓形虫菌株共循环的情况，其中更富侵袭性的菌株（如I型）可能倾向于定植于胎盘或胎儿组织，导致严重的生殖障碍。

这项研究首次报道了巴基斯坦山羊奶中弓形虫的基因型特征，证实了生山羊奶作为弓形虫潜在传播途径的公共卫生风险。研究结果强调，在生乳消费普遍的地区，实施牛奶巴氏消毒、猫群管理、改进畜牧实践等综合控制策略至关重要。同时，研究也为理解弓形虫在宿主内的组织嗜性和传播动力学提供了新的分子流行病学证据。