开发并验证了双重PCR和多重PCR检测方法，用于灵敏且快速地同时检测与印度柑橘衰退病相关的植原体（Candidatus liberibacter asiaticus）和柑橘衰退病毒

柑橘产量下降研究开发高效PCR检测技术

　　

摘要

印度东北部（NER）地区的柑橘果园在过去几十年中产量和产值出现了显著下降。2020年至2022年间进行的调查显示，该地区7个NER州和西孟加拉邦的卡利姆蓬（Kalimpong）共有12个柑橘品种出现了小叶、叶片黄化、叶脉间黄化、果实畸形、生长受阻等症状。研究确定植原体〈i>Candidatus Liberibacter asiaticus/黄龙病（HLB）和柑橘衰退病毒（CTV）是导致柑橘衰退的主要病原体。在本研究中，开发并优化了一种快速高效的双链和多重PCR/RT-PCR诊断方法，用于同时检测与柑橘衰退相关的〈i>Candidatus Phytoplasma物种（16SrI、II、V和XIV）、〈i>Ca. Liberibacter asiaticus以及CTV基因型（VT、T68/B165、T3/K10、HA16-5/Kpg3和B2）。优化后的引物能够在所有有症状的柑橘品种中，通过单链、双链和多重PCR检测方法扩增植原体〈i>16S rRNA基因片段（约1.25 kb）、HLB的〈i>omp基因片段（约809 bp）和/或CTV的〈i>coat protein基因片段（约672 bp）。我们使用12个品种的38个柑橘衰退分离株验证了这些检测方法，结果发现存在以下混合感染情况：植原体+HLB（12/38）、植原体+CTV（2/38）、CTV+HLB（7/38）以及三种病原体同时存在（17/38）。本研究开发的双链和多重PCR/RT-PCR方法为快速、灵敏地检测受柑橘衰退影响的果园中的单一、双重或混合感染提供了有效工具。该方案有助于快速评估印度各地的旧柑橘果园和新建立的柑橘苗圃，从而制定有效的管理策略来应对这一病害。