LINC00885通过调控miR-654-3p/SLBP轴激活PI3K/Akt通路促进肺鳞癌恶性进展的机制研究

《Clinical and Experimental Medicine》：LINC00885 promotes lung squamous cell carcinoma by upregulating SLBP expression to activate PI3K/Akt pathway

本研究针对肺鳞状细胞癌（LUSC）靶向治疗手段匮乏的临床困境，通过多组学技术揭示长链非编码RNA LINC00885通过竞争性结合miR-654-3p上调SLBP表达，进而激活PI3K/Akt信号通路驱动LUSC恶性进展的分子机制。研究发现为LUSC提供了新的诊断生物标志物和潜在治疗靶点。

　　

肺鳞状细胞癌（Lung Squamous Cell Carcinoma, LUSC）作为非小细胞肺癌的重要亚型，因其缺乏有效的靶向治疗策略，患者预后普遍较差。尽管近年来早期诊断技术取得显著进展，但由于早期症状隐匿、患者年龄偏大且常合并多种基础疾病，LUSC的死亡率仍居高不下。深入探索LUSC发病的分子机制，寻找新的治疗靶点，成为当前肺癌研究领域的迫切需求。

长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）作为长度超过200个核苷酸且不编码蛋白质的RNA分子，在肿瘤发生发展中扮演着关键调控角色。越来越多的证据表明，lncRNA通过调控基因表达影响肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等生物学行为。生物信息学分析发现LINC00885在LUSC组织中显著高表达，且在其他恶性肿瘤如宫颈癌、膀胱癌和乳腺癌中均显示促癌功能，但其在LUSC中的具体作用机制尚不明确。

本研究通过整合生物信息学分析、临床标本验证、体外功能实验和体内动物模型，系统阐述了LINC00885在LUSC中的致癌机制。研究发现LINC00885通过吸附miR-654-3p解除其对SLBP（stem-loop binding protein）的抑制作用，进而激活PI3K/Akt信号通路，最终促进LUSC的恶性进展。这一发现不仅揭示了LINC00885/miR-654-3p/SLBP轴在LUSC中的新颖调控网络，也为LUSC的精准治疗提供了潜在靶点。

关键技术方法包括：基于GEPIA和starBase数据库的生物信息学分析；40对LUSC患者癌与癌旁组织的临床样本验证；细胞增殖（EdU掺入、集落形成）、迁移侵袭（Transwell小室）等体外功能实验；染色质RNA纯化（ChIRP）、荧光原位杂交（FISH）等分子互作验证；以及裸鼠异种移植模型进行体内功能验证。

LINC00885在LUSC中表达上调

生物信息学分析显示LINC00885在LUSC组织中表达显著高于正常肺组织。临床样本验证进一步证实LINC00885在LUSC肿瘤组织中高表达，且其表达水平与患者TNM分期呈正相关。在LUSC细胞系（SW900、SKMES-1）中同样观察到LINC00885的显著上调。亚细胞定位实验表明LINC00885主要分布于细胞质，提示其可能作为竞争性内源RNA（ceRNA）发挥功能。

LINC00885缺失抑制LUSC恶性表型

通过短发夹RNA（shRNA）敲低LINC00885表达后，LUSC细胞的增殖能力（EdU掺入和集落形成实验）显著降低。同时，LINC00885敲低增强了LUSC细胞对 cisplatin（DDP）的敏感性，降低了半数抑制浓度（IC₅₀）。Transwell实验表明LINC00885缺失显著抑制了细胞的迁移和侵袭能力。Western blot结果显示上皮标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达上调，间质标志物N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达下调，说明LINC00885敲低抑制了上皮-间质转化（EMT）过程。

LINC00885与miR-654-3p直接结合

starBase数据库预测并实验验证了LINC00885与miR-654-3p之间存在结合位点。双荧光素酶报告基因实验和ChIRP实验证实了LINC00885可直接结合miR-654-3p。FISH实验显示两者在细胞质中共定位。功能上，LINC00885敲低可上调miR-654-3p表达，而miR-654-3p过表达对LINC00885水平无影响，表明LINC00885通过吸附miR-654-3p发挥ceRNA功能。

miR-654-3p抑制逆转LINC00885敲低效应

挽救实验表明，抑制miR-654-3p可部分逆转LINC00885敲低对LUSC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用，证明miR-654-3p是LINC00885功能的关键下游效应分子。

SLBP是miR-654-3p的功能靶标并介导PI3K/Akt激活

生物信息学筛选和实验验证确定SLBP是miR-654-3p的直接靶标。双荧光素酶报告基因实验证实miR-654-3p通过结合SLBP的3'非翻译区（3'UTR）抑制其表达，而LINC00885过表达可解除这一抑制。LINC00885敲低降低了SLBP的表达以及PI3K和Akt的磷酸化水平，SLBP过表达则可逆转这一效应，表明LINC00885通过miR-654-3p/SLBP轴激活PI3K/Akt信号通路。

SLBP过表达逆转LINC00885敲低的抑癌效应

功能挽救实验证明，SLBP过表达可有效逆转LINC00885敲低对LUSC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用，进一步确认SLBP是LINC00885/miR-654-3p轴的关键下游效应分子。

LINC00885敲低抑制体内肿瘤生长

裸鼠异种移植模型证实，敲低LINC00885可显著抑制移植瘤的生长，表现为肿瘤体积和重量减小。分子分析显示瘤体内LINC00885和SLBP表达下调，miR-654-3p表达上调，EMT标志物表达逆转，验证了LINC00885/miR-654-3p/SLBP轴在体内的生物学功能。

本研究系统阐明了LINC00885作为ceRNA通过吸附miR-654-3p上调SLBP表达，进而激活PI3K/Akt信号通路促进LUSC恶性进展的分子机制。这一发现不仅揭示了LINC00885在LUSC中新的致癌功能，也拓展了ceRNA调控网络在肿瘤中的作用模式。LINC00885、miR-654-3p和SLBP构成的调控轴为LUSC的分子分型、预后判断和靶向治疗提供了新的潜在靶点。未来研究可聚焦于开发靶向LINC00885的治疗策略，并探索其与现有化疗药物的联合应用潜力，以期为改善LUSC患者预后提供新思路。