新型eRF3a降解剂CC-90009联合低剂量庆大霉素增强表皮松解症无义突变通读治疗

《Molecular Therapy Nucleic Acids》：Novel eRF3a degrader enhances gentamicin-induced premature termination codon readthrough in epidermolysis bullosa

本研究针对遗传性皮肤疾病隐性营养不良型表皮松解症（RDEB）和交界型表皮松解症（JEB）中无义突变导致的蛋白表达缺失问题，通过联合应用eRF3a降解剂CC-90009与低剂量庆大霉素，显著提升Ⅶ型胶原（C7）和层粘连蛋白332的表达水平，并验证其功能性与定位正确性，为无义突变相关疾病提供新型协同治疗策略。

　　

在遗传性皮肤疾病领域，隐性营养不良型表皮松解症（Recessive Dystrophic Epidermolysis Bullosa, RDEB）和交界型表皮松解症（Junctional Epidermolysis Bullosa, JEB）因基因突变导致皮肤脆性增加，患者终身伴随严重水疱和瘢痕形成。其中，无义突变（Nonsense Mutation）引发的提前终止密码子（Premature Termination Codon, PTC）是重要致病机制之一，约占RDEB病例的25%，而在JEB的LAMB3基因突变中占比高达80%。此类突变使mRNA翻译提前终止，生成截短且无功能的蛋白，如Ⅶ型胶原（Type VII Collagen, C7）或层粘连蛋白332（Laminin 332）缺失，进而破坏真皮-表皮连接（Dermal-Epidermal Junction, DEJ）结构。目前临床治疗以伤口护理为主，虽已有局部基因疗法获批，但针对无义突变的系统性治疗手段仍有限，且长期使用氨基糖苷类如庆大霉素（Gentamicin）诱导PTC通读易引发肾毒性和耳毒性。因此，开发低毒性、高效能的协同疗法成为迫切需求。

本研究发表于《Molecular Therapy Nucleic Acids》，团队通过联合eRF3a降解剂CC-90009与低剂量庆大霉素，在RDEB和JEB原代细胞模型中验证其协同促进PTC通读的能力。关键技术方法包括：利用来自RDEB和JEB患者的原代成纤维细胞与角质形成细胞进行药物处理；通过免疫印迹分析C7和层粘连蛋白β3表达；采用细胞迁移指数和基质粘附实验评估蛋白功能性；构建三维皮肤等效模型并通过免疫荧光染色观察蛋白在DEJ的定位。

CC-90009和庆大霉素联合疗法在RDEB成纤维细胞中协同诱导全长C7的产生

研究者在携带无义突变的RDEB成纤维细胞中发现，CC-90009单药疗效有限（C7表达量仅为正常细胞的8.4%-15.2%），而联合低剂量庆大霉素（50 μg/mL）可使C7表达提升至正常水平的74.6%，且效果优于高剂量庆大霉素单药（200 μg/mL）。

CC-90009和庆大霉素联合疗法在RDEB角质形成细胞中协同诱导全长C7的产生

在RDEB角质形成细胞中，联合疗法同样显著提升C7表达（达正常水平的41.4%），并促进蛋白分泌至细胞培养基，且连续给药6天后C7产量呈剂量依赖性增长。

CC-90009和庆大霉素联合疗法在JEB角质形成细胞中协同诱导层粘连蛋白332的产生

针对JEB角质形成细胞，联合疗法使层粘连蛋白β3表达量达正常水平的44.7%，为高剂量庆大霉素单药的3倍，且对常见突变R635X亦有效。

联合疗法逆转RDEB与JEB细胞的异常表型

通过细胞迁移实验发现，联合疗法可显著纠正RDEB成纤维细胞和角质形成细胞的高迁移性（Migration Index, MI），使其恢复至正常水平。在JEB细胞中，联合疗法还改善了因层粘连蛋白缺失导致的基质粘附缺陷，5分钟内细胞脱落率从90%降至20%以下。

诱导的C7和层粘连蛋白332在皮肤等效模型中定位于DEJ

三维皮肤等效模型显示，经联合疗法处理的RDEB和JEB角质形成细胞所产生的C7与层粘连蛋白332可正确沉积于DEJ，其荧光强度分别达正常水平的71.21%和84.92%，且与α6整合素共定位证实其功能结构完整性。

结论与讨论

本研究首次证实CC-90009与低剂量庆大霉素联用可通过降解eRF3a和抑制无义介导的mRNA衰变（Nonsense-Mediated Decay, NMD）协同增强PTC通读效率，使C7和层粘连蛋白332表达量超越35%的功能阈值，并成功纠正细胞迁移、粘附等表型缺陷。该策略显著降低庆大霉素用量，规避了传统氨基糖苷类的毒性风险，为RDEB、JEB及其他无义突变相关遗传病提供了更安全有效的治疗方向。未来需扩大突变类型验证范围，并推进临床转化研究。