SUCLG2介导硝唑尼特抗日本脑炎病毒作用机制研究

《Antiviral Research》：SUCLG2 plays a crucial role in the activity of Nitazoxanide against Japanese encephalitis virus

本文揭示了硝唑尼特（NTZ）通过调控琥珀酰辅酶A合成酶（SUCLG2）发挥抗日本脑炎病毒（JEV）作用的新机制。研究发现SUCLG2不仅能抑制JEV复制、减轻ROS产生并促进ATP恢复，还可激活IFN-β介导的天然免疫。该研究为开发抗JEV靶向药物提供了理论依据。

　　

亮点

NTZ抑制JEV感染并增强SUCLG2表达

为评估药物细胞毒性对抗病毒活性的潜在影响，我们检测了NTZ的细胞毒性。研究发现当NTZ浓度在20μM或以下时，BHK-21细胞存活率保持在80%以上（图1A）。通过RT-qPCR和Western blot检测JEV非结构蛋白NS3的表达水平，结果显示NTZ以剂量依赖的方式抑制NS3的mRNA和蛋白表达（图1）。

SUCLG2在JEV感染中的功能作用

为探究SUCLG2在JEV感染中的功能，我们通过siRNA敲低BHK-21细胞中的SUCLG2表达。Western blot证实转染siRNA后SUCLG2蛋白水平显著降低（图2A）。与对照组相比，SUCLG2敲低使JEV NS3蛋白表达显著增加（图2B），表明SUCLG2缺失促进了JEV复制。相反，SUCLG2过表达质粒转染后（图2C），JEV NS3蛋白水平明显下降（图2D），证实SUCLG2过表达能抑制JEV增殖。

SUCLG2调控JEV诱导的ROS产生和ATP水平

通过DCFH-DA探针检测发现，JEV感染显著提高了细胞内ROS水平，而SUCLG2过表达有效逆转了这种升高（图3A）。同时，SUCLG2过表达还促进了JEV感染后ATP水平的恢复（图3B）。这些结果提示SUCLG2可能通过维持细胞能量稳态和氧化还原平衡来抑制JEV。

SUCLG2激活天然免疫反应

通过双荧光素酶报告基因检测发现，SUCLG2过表达显著增强了IFN-β启动子活性（图4A）。RT-qPCR结果进一步显示，SUCLG2过表达提高了IFN-β mRNA水平（图4B），表明SUCLG2可通过激活I型干扰素通路发挥抗病毒作用。

SUCLG2与NTZ的相互作用

表面等离子共振（SPR）分析显示，SUCLG2与NTZ的结合响应值较弱（图5），表明两者间直接相互作用不强，提示NTZ可能通过间接方式调控SUCLG2功能。

结论

本研究首次证实SUCLG2在NTZ抗JEV感染中发挥关键作用。SUCLG2通过抑制病毒复制、调控ROS/ATP平衡和激活IFN-β通路等多重机制介导NTZ的抗病毒效应，为开发针对JEV的宿主靶向疗法提供了新视角。