Azoramide通过维持钙稳态缓解内质网应激诱导的神经细胞死亡

本文研究发现Azoramide能够通过增强内质网钙离子（Ca2+）滞留能力，显著缓解毒胡萝卜素（TG）诱导的内质网应激（ER stress）、线粒体功能障碍和细胞凋亡，为神经退行性疾病治疗提供了新的钙稳态调控靶点。

　　

亮点

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  Azoramide可减轻毒胡萝卜素（TG）诱导的内质网应激（ER stress）和细胞死亡
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  Azoramide显著增强内质网钙离子（Ca²⁺）滞留能力
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  该研究揭示了Azoramide通过调控钙稳态发挥神经保护作用的新机制

材料

Azoramide（货号HY-18705）购自MedChem Express公司（美国新泽西）。毒胡萝卜素（Thapsigargin，货号SC0389-2mM）购自碧云天（中国）。Cleaved caspase-3（货号9664S）、CHOP（货号2895S）、p-PERK（货号3179）、ATF4（货号11815）、ATF6（货号65880）和β-肌动蛋白（β-actin，货号4967S）抗体购自Cell Signaling Technology公司（美国马萨诸塞州）。XBP1（货号ab220783）购自Abcam公司（英国剑桥）。p-IRE1α（货号PA5-105424）购自Invitrogen公司（美国圣地亚哥）。

细胞培养

人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系培养于含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM/F12培养基中，在37°C、5%二氧化碳（CO₂）的湿润培养箱中维持培养。

Azoramide降低TG诱导的人SH-SY5Y细胞死亡

既往研究表明TG可导致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞死亡（Mukerjee等，2000；Nguyen等，2002）。我们首先采用CCK8法检测TG对SH-SY5Y细胞活力的影响。如图1A所示，0.01至3μM浓度的TG分别将细胞存活率降低至72%、63%、63%、61%、57%和15%。后续实验选择0.3μM TG浓度。为评估Azoramide对TG诱导的细胞活力下降的影响......

讨论

SERCA泵通过将胞质钙离子（Ca²⁺）主动转运回内质网腔，在维持钙稳态中起关键作用。值得注意的是，与年轻神经元相比，衰老神经元中的SERCA活性显著受损（Chou等，2023），表明衰老过程中钙调控机制存在根本性紊乱。除与内质网应激（ER stress）相关外，钙稳态失调还与神经退行性疾病的多种病理特征有关......